[發明專利]一種獲取苔草無菌組培苗的方法

在審

• 申請號: 201911346296.1
• 申請日: 2019-12-24
• 公開（公告）號: CN110959531A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 崔榮峰;梁芳;董愛香;王茜;張紅艷;董京蓉;苑超;辛海波;張鉞;叢日晨
• 申請（專利權）人: 北京市園林科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京一枝筆知識產權代理事務所(普通合伙) 11791
• 代理人: 張慶瑞

1.獲取苔草無菌組培苗的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1，采集外植體：選擇遠離地面的植物材料；

S2，消毒：包括流水沖洗1-2小時、在含有抗生素的水中預先水培養、乙醇消毒、次氯酸鈉消毒、升汞消毒中的一種或多種的組合；

S3，抑菌培養：培養基包括羧芐青霉素、頭孢霉素、氨中噻肟頭孢菌素、四環素、利福平或多粘菌素B中的一種或兩者以上的組合；

S4，將步驟S3培養的幼苗煉苗后獲得的生根組培苗移栽于移栽基質中，培育。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：該方法具體按以下步驟進行：

S1，采集外植體：選擇健康的優良植株，高度控制在3毫米到6毫米，去除植株的頂部葉尖；

S2，消毒：將擦拭后的植體使用清水沖洗60-80分鐘，在含有抗生素的水中預先水培養2-3天，然后再使用70％乙醇消毒2分鐘，5％次氯酸鈉消毒20分鐘或1‰的升汞消毒10分鐘，然后使用無菌水沖洗3-5次；

S3，抑菌培養：將沖洗后的植體種入濃度為250mg/L羧芐青霉素或頭孢霉素的培養基進行培養，在培養基中分別加入濃度為25mg/L的氨中噻肟頭孢菌素、濃度為25mg/L的四環素、濃度為6mg/L的利福平、濃度為6mg/L的多粘菌素B、濃度為9-12mg/L的6-BA、濃度為20-30g/L的蔗糖培養30-40天后轉入下一階段；

S4，苔草芽分化培養：分化培養的培養基為MS+6-BA濃度1.5-2mg/L+NAA濃度0.1-0.2mg/L或MS+6-BA濃度3.5-4mg/L+IAA濃度0.2-0.3mg/L，培養20-25天；

S5，將煉苗后的生根組培苗移栽于移栽基質中，培育1-2個月成苗。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟S4中所述分化培養的培養基為MS+6-BA1.5 mg/L+NAA 0.1mg/L或MS+6-BA3.5 mg/L+IAA 0.2mg/L。

4.如權利要求1至3任一項所述的方法，其特征在于：所述抑菌培養光照至少12個小時/天光照，光照強度2000-3100Lx，培養溫度在25-28℃，Ph5.8～6。

5.如權利要求4所述的一種獲取苔草無菌組培苗的方法，其特征在于：所述S2消毒可采用如下方式：將擦拭后的植體使用清水沖洗60-80分鐘，在含有抗生素的水中預先水培養2-3天，然后再使用70％乙醇消毒2分鐘，1‰的汞消毒10分鐘，然后使用無菌水沖洗3-5次。

6.如權利要求1至4任一項所述的方法，其特征在于，所述抑菌培養光照為12個小時/天光照，光照強度為2000Lx，培養溫度為25℃，Ph5.8。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于：所述移栽基質由泥炭、珍珠巖、草炭、和蛭石按照1:2:1:2配制而成。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于：步驟S1中所述植物材料包括幼穗幼胚、莖尖、側芽或幼根中的一種或多種。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于：所述煉苗為：所述幼苗根長2-4cm時解除密封，煉苗5-7天。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于：所述分化培養的培養基內部PH值控制在5.8-6之間。