[發明專利]一種分離的核酸分子及其應用

在審

• 申請號: 201911342624.0
• 申請日: 2019-12-23
• 公開（公告）號: CN113088519A
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 余騰輝;李揚;劉新星;劉源;周恩興;戴熙慧敏;饒毅
• 申請（專利權）人: 北京原基品德生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/67;C12N15/85;A61K48/00;A61P1/16
• 代理公司: 上海巔石知識產權代理事務所(普通合伙) 31309
• 代理人: 張琤;蔣舫瑋

本申請涉及一種分離的核酸分子，其以5’至3’方向包含肝臟特異性表達調控元件以及與所述肝臟特異性表達調控元件可操作連接的目的基因，能增加所述目的基因在肝臟或肝細胞或者肝細胞來源的細胞系中的表達量。本申請還提供了一種包含所述分離的核酸分子的載體，診斷或藥物組合物，及其應用。

技術領域

本申請涉及生物醫藥領域，具體的涉及一種分離的核酸分子。所述核酸分子包含肝臟特異性表達調控元件，能使目的基因在肝臟或肝細胞中的表達量增加。

背景技術

隨著分子生物學的發展，基因療法已經在實驗和臨床中用于治療一系列病癥和疾病，包括由于肝臟的蛋白合成功能障礙造成的相關疾病。由于肝臟所具有的蛋白翻譯后的修飾功能使其成為基因治療遺傳性血液病的重要靶器官，肝臟基因療法能將功能基因導入基因缺陷的個體并使其在體內長期高效表達。但目前限制肝臟基因治療的主要因素是基因在肝臟內表達水平較低，造成低水平表達的原因之一是轉錄活性不強，為加強基因在體內的高水平表達，構建肝臟高效表達調控序列成為必需。

為了促進目的基因在宿主細胞中的表達，通常將目的基因包含在也含有表達目的基因所必需的各種調控元件的構建體中。這些調控元件可包括，例如，啟動子、增強子、起始信號、終止信號和其他調節元件。理想的元件之間的共同作用不僅能促進目的基因在宿主細胞中的穩定表達，而且其表達水平足以實現其功能或活性。啟動子以及其他調控元件決定了細胞類型的特異性、轉導功效以及表達水平和持續時間。目的基因在宿主細胞中的穩定高效表達可能難以實現。因此，亟需開發有助于目的基因在宿主細胞(如肝臟細胞)中穩定且高效表達的核酸分子或載體。

發明內容

在一個方面，本申請提供了一種分離的核酸分子，其以5’至3’方向包含肝臟特異性表達調控元件以及與所述肝臟特異性表達調控元件可操作連接的目的基因，其中與使用核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示的表達調控元件相比，所述肝臟特異性表達調控元件使得所述目的基因在肝臟或肝細胞中的表達量增加至少100％。

在某些實施方式中，本申請所述的分離的核酸分子中所述肝臟特異性表達調控元件包含：

a)源自狗serpinA1基因的啟動子或其功能性片段；

b)源自爪蟾卵黃蛋白原A2基因的啟動子或其功能性片段；

c)源自爪蟾白蛋白基因的啟動子或其功能性片段；以及

d)源自人serpinA1基因的啟動子或其功能性片段。

在某些實施方式中，本申請所述的分離的核酸分子中所述源自狗serpinA1基因的啟動子或其功能性片段包含SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。

在某些實施方式中，本申請所述的分離的核酸分子中所述源自爪蟾卵黃蛋白原A2基因的啟動子或其功能性片段包含SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。

在某些實施方式中，本申請所述的分離的核酸分子中所述源自爪蟾白蛋白基因的啟動子或其功能性片段包含SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。

在某些實施方式中，本申請所述的分離的核酸分子中所述源自人serpinA1基因的啟動子或其功能性片段包含SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列。

在某些實施方式中，本申請所述的分離的核酸分子中所述肝臟特異性表達調控元件以5’至3’的方向依次包含：所述源自狗serpinA1基因的啟動子或其功能性片段，所述源自爪蟾卵黃蛋白原A2基因的啟動子或其功能性片段，所述源自爪蟾白蛋白基因的啟動子或其功能性片段和所述源自人serpinA1基因的啟動子或其功能性片段。

在某些實施方式中，本申請所述的分離的核酸分子還包含內含子，所述內含子位于所述肝臟特異性表達調控元件和所述目的基因之間。

在某些實施方式中，本申請所述的分離的核酸分子中所述內含子為SV40內含子或MVM內含子。