[發明專利]納米酶試紙條檢測諾如病毒的方法

在審

• 申請號: 201911341144.2
• 申請日: 2019-12-23
• 公開（公告）號: CN111007251A
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 劉鍵;段德民;張永江
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院;吉爾生物科技(天津)有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 北京冠榆知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11666
• 代理人: 朱亞琦

本發明公開納米酶試紙條檢測諾如病毒的方法，包括如下步驟：(1)納米酶的合成；(2)納米酶?諾如抗體探針的制備；(3)納米酶免疫層析試紙條的組裝；(4)納米酶免疫層析試紙條對諾如病毒的檢測。本申請的納米酶免疫層析試紙條的檢測的靈敏度比膠體金試紙條可提高10倍，納米酶免疫層析試紙條對諾如病原體檢測的敏感性高、可靠性高，且對諾如病毒具有特異性識別。本申請的納米酶試紙條檢測諾如病毒的方法兼具膠體金技術的簡便、快速、可現場應用的優點，又具有高靈敏度的特性，具有廣闊的發展前景。

技術領域

本發明涉及諾如病毒檢測技術領域。具體地說是納米酶試紙條檢測諾如 病毒的方法。

背景技術

諾如病毒(又稱諾瓦克病毒，Norwalk Viruses)，是杯狀病毒科家族中 的一員，是引起人類病毒性腸胃炎的主要原因之一，約占全世界腹瀉病例的 18％。在發達國家，諾如病毒被認為是兒童和成人非細菌性腹瀉爆發的最常 見原因，僅在美國每年就造成約1900-2100萬人患病，56000-71000人住 院，570-800人死亡。雖然輪狀病毒被認為是發展中國家兒童腹瀉的主要原 因，在已將輪狀病毒疫苗納入免疫規劃的國家，諾如病毒正迅速成為兒童嚴 重腸胃炎最常見的病原。最近的一項研究認為，發展中國家有20多萬兒童 死于諾如病毒。

由此可見，諾如病毒仍具有一定的傳染性和危害性，目前，對諾如病毒 的檢測主要核酸檢測和ELISA、膠體金等方法，當核酸檢測和ELISA方法 技術繁雜，需要專業技術人員操作，膠體金試紙條靈敏度底，因此研制出諾 如病毒快速靈敏的檢測方法非常必要。

諾如病毒為無包膜單股正鏈RNA病毒，變異速度快，每隔2-3年即可出 現引起全球流行的新變異株，環境抵抗力強、感染劑量低，感染后潛伏期短、 排毒時間長、免疫保護時間短，且傳播途徑多樣、全人群普遍易感，因此， 諾如病毒具有高度傳染性和快速傳播能力。諾如病毒感染發病的主要表現為 腹瀉和/或嘔吐，國際上通常稱之為急性胃腸炎。我國一直將其列入丙類傳 染病中“其他感染性腹瀉病”進行報告管理，這在一定程度上影響了以嘔吐 為主要癥狀的諾如病毒感染病例及其暴發的報告。再加上諾如病毒具有自愈 性，所以，很多醫院都不檢查諾如病毒，這樣就忽視了對諾如病的監控。諾 如病毒是全球急性胃腸炎散發病例和暴發疫情的主要致病原，疾病負擔嚴重。 因此，應加強對諾如病毒的檢測和控制。

在檢測方面，諾如病毒無蛋白包膜，目前沒法進行體外培養，限制了病 毒的分離和血清型分型鑒定。只有靠生化方法和分子生物學方法進行鑒定。

目前的主要檢測方法有：

1.核酸檢測和基因型鑒定，主要有Real-time RT-PCR和傳統PCR，準 確度相對高，但過程繁瑣，需要專門的儀器設備和專業技術人員。

2.抗原檢測

抗原檢測主要有ELISA方法，也已開發出大批的商品化試劑盒，可適用 于暴發疫情中大量樣本的篩查，但ELISA試劑盒成本高、敏感性低，需要專 業技術人員操作，不夠簡便快捷。膠體金檢測，是目前市場上最為普遍的快 捷檢測，但靈敏度相對較低。目前，也逐漸有納米金等免疫層析方法的研究。 以尋求簡便快捷高靈敏度的檢測方法。

發明內容

為此，本發明所要解決的技術問題在于提供一種檢測靈敏度高、操作簡 便的納米酶試紙條檢測諾如病毒的方法。

為解決上述技術問題，本發明提供如下技術方案：

納米酶試紙條檢測諾如病毒的方法，包括如下步驟：

(1)納米酶的合成；

(2)納米酶-諾如抗體探針的制備；

(3)納米酶免疫層析試紙條的組裝；

(4)納米酶免疫層析試紙條對諾如病毒的檢測。