[發明專利]納米酶試紙條檢測諾如病毒的方法

在審

• 申請號: 201911341144.2
• 申請日: 2019-12-23
• 公開（公告）號: CN111007251A
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 劉鍵;段德民;張永江
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院;吉爾生物科技(天津)有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 北京冠榆知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11666
• 代理人: 朱亞琦

1.納米酶試紙條檢測諾如病毒的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)納米酶的合成；

(2)納米酶-諾如抗體探針的制備；

(3)納米酶免疫層析試紙條的組裝；

(4)納米酶免疫層析試紙條對諾如病毒的檢測。

2.根據權利要求1所述的納米酶試紙條檢測諾如病毒的方法，其特征在于，在步驟(1)中，采用水熱法合成納米酶：將FeCl ₃·6H₂O溶解于乙二醇中，攪拌溶解，再加入醋酸鈉，待混合物完全溶解后，密封于高壓反應釜中，進行反應，得到的產物磁分離，棄上清，沉淀用乙醇清洗，然后用電熱恒溫干燥箱烘干保存，得到納米酶。

3.根據權利要求2所述的納米酶試紙條檢測諾如病毒的方法，其特征在于，在步驟(1)中，采用水熱法合成納米酶：將FeCl ₃·6H₂O溶解于乙二醇中，攪拌溶解，再加入一定量的醋酸鈉，待混合物完全溶解后，密封于高壓反應釜中，200℃反應14小時，得到的產物磁分離，棄上清，沉淀用乙醇清洗3次，然后用電熱恒溫干燥箱烘干保存，得到納米酶。

4.根據權利要求1所述的的納米酶試紙條檢測諾如病毒的方法，其特征在于，在步驟(2)中，

(2-1)取步驟(1)中制備的納米酶，用去離子水洗滌；

(2-2)離心后，棄上清液；沉淀用MES緩沖溶液重懸，同時加入EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)和NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)，混勻后，置于搖床內活化；

(2-3)活化后，用MES緩沖溶液洗滌，然后用MES緩沖溶液重懸，得到活化的納米酶；

(2-4)諾如病毒鼠單克隆抗體與活化的納米酶溶液過夜孵育；

(2-5)加入Tris緩沖液，終止反應；

(2-6)磁分離后，用5％BSA-Tris緩沖液重懸，即可得納米酶-諾如抗體探針。

5.根據權利要求4所述的納米酶試紙條檢測諾如病毒的方法，其特征在于，在步驟(2)中，

(2-1)取步驟(1)中制備的納米酶500μL，納米酶的濃度為5mg/mL，用1mL去離子水洗滌三次；

(2-2)離心后，棄上清液；沉淀用1mL的MES緩沖溶液重懸，MES緩沖溶液的pH為6.0，同時加入20μL的EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)和50μL的NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)，混勻后，置于搖床內活化30min；EDC的濃度為0.4mol/L，NHS的濃度為0.1mol/L；搖床的轉速為70rpm；

(2-3)活化后，用1mL的MES緩沖溶液洗滌一次，然后用500μL的MES緩沖溶液重懸，得到活化的納米酶；

(2-4)取50μg的諾如病毒鼠單克隆抗體與活化的納米酶溶液過夜孵育，孵育溫度為4℃；

(2-5)用Tris緩沖液在室溫下孵育30min，終止反應；Tris緩沖液的濃度為0.05mol/L，pH為7.2；

(2-6)磁分離后，用0.5mL的5％BSA-Tris緩沖液重懸，即可得納米酶-諾如抗體探針。