[發(fā)明專(zhuān)利]人血漿中同時(shí)測(cè)定伊馬替尼及伊馬替尼代謝物濃度的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911337424.6
• 申請(qǐng)日: 2019-12-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111122727A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳燕;肖洪濤;周瑜;王秋菊;馬洪麗
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 四川省腫瘤醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/54;G01N30/60
• 代理公司: 成都環(huán)泰專(zhuān)利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 51242
• 代理人: 李斌;李輝

1.一種人血漿中同時(shí)測(cè)定伊馬替尼及伊馬替尼代謝物濃度的方法，其特征在于：

一、標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定

(a)標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：

伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：精確稱(chēng)取伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)品5mg置于5mL容量瓶，用50％甲醇的水溶液溶解并定容于5mL,得到標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A，將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A用50％的甲醇進(jìn)行稀釋?zhuān)謩e在含有130-14000ng/mL伊馬替尼的濃度范圍內(nèi)配制出六種標(biāo)準(zhǔn)工作液，并在-20℃條件下保存；

伊馬替尼代謝物(去甲伊馬替尼)標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：精確稱(chēng)取去甲伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)品5mg置于5mL容量瓶，用50％甲醇的水溶液溶解并定容于5mL,得到標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液B，將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液B用50％的甲醇進(jìn)行稀釋?zhuān)謩e在含有130-14000ng/mL去甲伊馬替尼的濃度范圍內(nèi)配制出六種標(biāo)準(zhǔn)工作液，并在-20℃條件下保存；

(b)用標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：

伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：用移液槍分別移取上述配制的若干種不同濃度的伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)工作液100μL，加入900μL空白血漿混合制成若干種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品；分別取1000μL有機(jī)處理劑于若干個(gè)2mL無(wú)菌Ep管中，分別加入400μL上述不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品，渦旋儀渦旋60s后，高速離心(145000rpm，8min)，分別用移液槍取上清液至進(jìn)樣瓶中，使用二維液相色譜儀對(duì)上述上清液進(jìn)行檢測(cè)，得到若干種不同濃度的伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，以上述若干個(gè)伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)X，若干個(gè)不同濃度的伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積為縱坐標(biāo)Y進(jìn)行線性回歸擬合，擬合得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y＝a*x+b，并且得出權(quán)重系數(shù)a和b；

去甲伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：用移液槍分別移取上述配制的若干種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液100μL，加入900μL空白血漿混合制成若干種不同濃度的去甲伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品；分別取1000μL有機(jī)處理劑于若干個(gè)2mL無(wú)菌Ep管中，分別加入400μL上述不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品，渦旋儀渦旋60s后，高速離心(145000rpm，8min)，分別用移液槍取上清液至進(jìn)樣瓶中，使用二維液相色譜儀對(duì)上述上清液進(jìn)行檢測(cè)，得到若干種不同濃度的去甲伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，以上述若干個(gè)去甲伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)X，若干個(gè)不同濃度的去甲伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積為縱坐標(biāo)Y進(jìn)行線性回歸，擬合得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y＝c*x+d，并且得出權(quán)重系數(shù)c和d；

二、待測(cè)血液樣品的分離處理：

(c)取待檢測(cè)血液樣品至少5mL，進(jìn)行離心(5000rpm，6-10min),取上清液，將上清液置于-20℃的條件下進(jìn)行保存；

三、待測(cè)血液樣品的有機(jī)處理：

(d)取1000μL有機(jī)處理劑于2mL無(wú)菌Ep管中，加入400μL步驟(二)中所述血液上清液，渦旋儀渦旋60s后，高速離心(145000rpm，6-10min)，用移液槍取上清液至進(jìn)樣瓶中，待進(jìn)樣分析；

四、待測(cè)血液樣品的定量檢測(cè)：

(e)采用已建立的二維液相色譜法，對(duì)上述步驟待測(cè)樣品進(jìn)行檢測(cè)，得到待測(cè)樣品伊馬替尼及其代謝物的色譜圖，從上述色譜圖中得到伊馬替尼與去甲伊馬替尼的峰面積及濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血漿中同時(shí)測(cè)定伊馬替尼及伊馬替尼代謝物濃度的方法，其特征在于：在步驟(a)中所述伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)工作液為六種。六種伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度分別為：13.44ng/mL、44.80ng/mL、112.00ng/mL、280.00ng/mL、700.00ng/mL和1400.00ng/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血漿中同時(shí)測(cè)定伊馬替尼及伊馬替尼代謝物濃度的方法，其特征在于：在步驟(a)中所述去甲伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)工作液為六種。六種去甲伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度分別為：13.44ng/mL、44.80ng/mL、112.00ng/mL、280.00ng/mL、700.00ng/mL和1400.00ng/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)血液中伊馬替尼及其代謝物血藥濃度的二維液相色譜法，其特征在于，在步驟(a)中，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A和標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液B是用含有50％甲醇水溶液進(jìn)行稀釋的。