[發(fā)明專利]人血漿中同時(shí)測(cè)定伊馬替尼及伊馬替尼代謝物濃度的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911337424.6
• 申請(qǐng)日: 2019-12-23
• 公開（公告）號(hào): CN111122727A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳燕;肖洪濤;周瑜;王秋菊;馬洪麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川省腫瘤醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/54;G01N30/60
• 代理公司: 成都環(huán)泰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 51242
• 代理人: 李斌;李輝

本發(fā)明公開了一種人血漿中同時(shí)測(cè)定伊馬替尼及伊馬替尼代謝物濃度的方法，一、標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定(a)標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制；去甲伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制；(b)用標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；去甲伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；二、(c)檢測(cè)血液的離心處理；三、(d)待測(cè)樣品的有機(jī)處理；四、(e)待測(cè)樣品的檢測(cè)。采用二維液相色譜法同時(shí)監(jiān)測(cè)人血漿中伊馬替尼及伊馬替尼代謝物濃度，具有可操作性強(qiáng)、快速、靈敏、具有良好重現(xiàn)性、且監(jiān)測(cè)成本較低的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，具體來說，涉及一種人血漿中同時(shí)測(cè)定伊馬替尼及伊馬替尼代謝物濃度的方法。

背景技術(shù)

伊馬替尼(Imatinib mesylate，IM)是一種小分子蛋白酪氨酸酶(TKIs)抑制劑，分子式為C₂₉H₃₁N₇O.CH₄SO₃，可以很好的抑制BCR-ABL酪氨酸激酶(TK)及c-Kit等的活性，其作為靶向藥物應(yīng)用于慢性粒細(xì)胞白血病、不可切除/或發(fā)生轉(zhuǎn)移的胃腸間質(zhì)瘤、急性淋巴細(xì)胞白血病等。該藥經(jīng)口服，生物利用度為98％，高脂飲食可略微降低其吸收。主要經(jīng)肝臟代謝，糞便排泄。研究發(fā)現(xiàn)，IM作為口服小分子靶向藥物，存在巨大的個(gè)體內(nèi)差異(約75％)及個(gè)體間差異(60％)，且不同種族和地域之間患者的IM血藥濃度存在差異，濃度有效閾值也存在區(qū)別。伊馬替尼在人體內(nèi)主要循環(huán)代謝產(chǎn)物是N-{4-甲基-3-[(4-吡啶-3-嘧啶-2-基)氨基]苯基}-4-(哌嗪-1-甲基)-苯甲酰胺(去甲伊馬替尼)，其藥效與原研藥相似，故伊馬替尼及其代謝產(chǎn)物在血液樣本中的濃度檢測(cè)在臨床精準(zhǔn)個(gè)體化治療中具有重要意義。

目前，IM血藥濃度監(jiān)測(cè)尚未在國(guó)內(nèi)臨床實(shí)踐中廣泛開展，關(guān)于IM血藥濃度監(jiān)測(cè)的方法只有高效液相色普法(HPLC)、質(zhì)譜法(MS)、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)等。HPLC法，重現(xiàn)性較差，且血液樣品前處理過程復(fù)雜；而MS及LC-MS/MS所用質(zhì)譜儀昂貴，液質(zhì)的“基質(zhì)效應(yīng)”影響因素大，重現(xiàn)性低且對(duì)操作人員要求較高。二維液相色譜法較HPLC精度高、重現(xiàn)性好，較MS及LC-MS/MS，無“基質(zhì)效應(yīng)”。且使用本發(fā)明方法，可大體積進(jìn)樣，提高靈敏度和準(zhǔn)確度；除此之外，本發(fā)明所采用的待測(cè)樣品處理步驟簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便，有機(jī)處理劑沉淀蛋白離心后上清液可直接進(jìn)樣，無需氮吹、復(fù)溶、萃取等操作。且本專利所述方法可同時(shí)對(duì)人血漿中IM及其代謝物(去甲伊馬替尼)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供一種人血漿中同時(shí)測(cè)定伊馬替尼及伊馬替尼代謝物濃度的方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種人血漿中同時(shí)測(cè)定伊馬替尼及伊馬替尼代謝物濃度的方法，

一、標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定

(a)標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：

伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：精確稱取伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)品5mg置于5mL容量瓶，用50％甲醇的水溶液溶解并定容于5mL,得到標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A，將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A用50％的甲醇進(jìn)行稀釋，分別在含有130-14000ng/mL伊馬替尼的濃度范圍內(nèi)配制出六種標(biāo)準(zhǔn)工作液，并在-20℃條件下保存；

伊馬替尼代謝物(去甲伊馬替尼)標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：精確稱取去甲伊馬替尼標(biāo)準(zhǔn)品5mg置于5mL容量瓶，用50％甲醇的水溶液溶解并定容于5mL,得到標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液B，將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液B用50％的甲醇進(jìn)行稀釋，分別在含有130-14000ng/mL去甲伊馬替尼的濃度范圍內(nèi)配制出六種標(biāo)準(zhǔn)工作液，并在-20℃條件下保存；

(b)用標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：