[發(fā)明專利]用于廢水處理的復(fù)合微生物菌劑的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911337053.1
• 申請(qǐng)日: 2019-12-23
• 公開（公告）號(hào): CN110964687A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖海燕;薛薇;黃華;朱敬華;王永樂;李蕊;夏冬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市工業(yè)微生物研究所有限公司;天津?qū)嵃l(fā)中科百奧工業(yè)生物技術(shù)有限公司;天津量信檢驗(yàn)認(rèn)證技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/36
• 分類號(hào): C12N1/36;C12N1/20;C02F3/34;C02F101/36;C12R1/38;C12R1/085;C12R1/01;C12R1/07
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 霍慧慧

1.一種用于廢水處理的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：所述制備方法的步驟為：

(1)原位系統(tǒng)菌群的增殖培養(yǎng)：配制增殖培養(yǎng)基并調(diào)節(jié)pH近中性，分裝于250mL錐形瓶中，增殖好氧微生物時(shí)，每瓶裝100mL；增殖兼氧微生物時(shí)，每瓶裝200mL；將6～8％的廢水或3～5％的相應(yīng)污泥接入增殖培養(yǎng)基中，在30～35℃條件下，好氧微生物采用振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速110～160r/min，培養(yǎng)時(shí)間約20～30小時(shí)；兼氧微生物群采用靜置培養(yǎng)，定時(shí)搖動(dòng)，培養(yǎng)時(shí)間約20～30小時(shí)；

(2)原位系統(tǒng)菌群的馴化篩選：以不同濃度的廢水作為碳源，根據(jù)廢水特點(diǎn)調(diào)節(jié)C/N，適當(dāng)添加無機(jī)鹽配制成篩選培養(yǎng)基，分裝于錐形瓶中，接入步驟(1)的菌種，培養(yǎng)方法同步驟(1)；馴化從低到高逐步提高廢水濃度，馴化時(shí)間72～80小時(shí)，最后在8000～10000r/15min條件下離心收集，得到馴化好的優(yōu)勢(shì)菌群；

(3)原位系統(tǒng)菌種的分離鑒定：將增值、篩選馴化得到的優(yōu)勢(shì)微生物菌群進(jìn)行10^-9～10^-1梯度的稀釋，取一定稀釋濃度的懸濁液，進(jìn)行平板涂布或劃線，在30～35℃條件下培養(yǎng)，挑取單菌落并轉(zhuǎn)接斜面再進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)分離純化出的菌種進(jìn)行16s rDNA基因高通量測序鑒定；

(4)原位系統(tǒng)宏基因組鑒定及優(yōu)勢(shì)菌判定：取原位系統(tǒng)中的廢水及污泥為樣品，進(jìn)行宏基因組鑒定，得到原位系統(tǒng)中主要微生物種類和分布占比關(guān)系，并以此為復(fù)配微生物菌劑的依據(jù)；

(5)優(yōu)勢(shì)菌種的復(fù)配與擴(kuò)大培養(yǎng)：根據(jù)步驟(3)及(4)的鑒定結(jié)果，將分離純化得到的主要菌種按占比關(guān)系進(jìn)行復(fù)配，得到微生物菌劑的配方，再將這些主要菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，接種量為5～10％，裝液率為70～75％，在30～35℃條件下，好氧微生物采用通風(fēng)攪拌培養(yǎng)，通風(fēng)比1:0.3～1；兼氧微生物采用靜置培養(yǎng)，定時(shí)搖拌，培養(yǎng)時(shí)間約20～30小時(shí)；

(6)微生物菌劑的制成與保藏：將步驟(5)擴(kuò)培的不同菌種的培養(yǎng)液按配方混合，再添加0.2～0.5％的吸附保護(hù)劑，混勻后制成菌劑，菌種的保藏是將培養(yǎng)得到的菌液離心收集，逐一做成凍干管長期保存，短期使用時(shí)將菌體在4℃條件下保藏，三個(gè)月內(nèi)使用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于廢水處理的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：步驟(1)中增殖培養(yǎng)基的成分為：蛋白胨8～12g/L、酵母粉4～6g/L、氯化鈉8～12g/L，所述增值培養(yǎng)基的pH為7.0～7.2。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于廢水處理的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：步驟(2)中篩選培養(yǎng)基的成分為：廢水、有機(jī)或無機(jī)含氮物、磷、鉀、鎂、鈣、鐵、硫、銅、鋅、鈷、錳、鉬無機(jī)鹽，所述篩選培養(yǎng)基的pH為7.0～7.2，所說篩選培養(yǎng)基經(jīng)121℃、20min滅菌備用。