[發明專利]構建側翼已知序列的測序文庫的引物組和方法

在審

• 申請號: 201911336316.7
• 申請日: 2019-12-23
• 公開（公告）號: CN113088561A
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 聶自豪;楊林;張艷艷;陳芳;蔣慧
• 申請（專利權）人: 深圳華大智造科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06;C12N15/11
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 肖陽

1.一種引物組，其特征在于，包括：第一組引物和第二組引物，

所述第一組引物包括第一引物和第二引物，沿5’端到3’端方向，所述第一引物包括第一特異性序列、第一間隔固定序列以及第一隨機序列，所述第二引物包括第二特異性序列、第二間隔固定序列以及第二隨機序列，所述第一特異性序列與雙鏈DNA中第1鏈上5’端已知序列匹配，所述第二特異性序列與所述雙鏈DNA中第2鏈上5’端已知序列匹配，所述第一間隔固定序列與所述雙鏈DNA中第1鏈不匹配，所述第二間隔固定序列與所述雙鏈DNA中第2鏈不匹配；

所述第二組引物包括第三引物和第四引物，所述第三引物的3’端為所述第一間隔固定序列，所述第四引物的3’端為所述第二間隔固定序列。

2.根據權利要求1所述的引物組，其特征在于，所述第一間隔固定序列和第二間隔固定序列為接頭序列；

所述第三引物和第四引物的5’端包括文庫標簽序列和文庫標簽測序引物結合序列。

3.根據權利要求1所述的引物組，其特征在于，所述已知序列的長度為18～30nt，所述第一間隔固定序列和第二間隔固定序列的長度分別為18～30nt，所述第一隨機序列和第二隨機序列的長度分別為6～15nt。

4.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有容器以及位于所述容器中的權利要求1～3任一項所述的引物組。

5.一種構建側翼已知序列的測序文庫的方法，其特征在于，包括：

利用第一組引物對側翼已知序列進行第一輪PCR擴增，以便得到第一擴增產物；

利用第二組引物對所述第一擴增產物進行第二輪PCR擴增，以便得到側翼已知序列測序文庫，

其中，所述第一組引物與第二組引物是如權利要求1～3任一項所述引物組中所限定的。

6.一種測序文庫，其特征在于，所述測序文庫是利用權利要求5所述的方法制備的。

7.權利要求6所述測序文庫的用途，其特征在于，用作高通量測序平臺的文庫。

8.根據權利要求7所述的用途，其特征在于，所述高通量測序平臺選自MGI測序平臺、Illumina測序平臺或proton測序平臺。