[發明專利]檢測AChE-Ab的電化學發光試劑盒及其制法

在審

• 申請號: 201911333628.2
• 申請日: 2019-12-23
• 公開（公告）號: CN111024939A
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發明（設計）人: 卜梅杰;泮鋒綱;丁俊杰;施啟堯
• 申請（專利權）人: 江蘇三聯生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N27/26;G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種新型的從血液中檢測乙酰膽堿酯酶抗體（AChE?Ab）的電化學發光試劑盒及其制備方法。制備的試劑盒包括：包被鏈霉親和素的磁珠微粒工作液，生物素標記的AChE抗原工作液，三聯吡啶釕標記的抗人IgG抗體工作液，AChE?Ab的校準品和/或質控品工作液，含三丙胺的電化學發光底物液，以及清洗液。所制備試劑盒的發光體系為電化學發光，利用鏈霉親和素?生物素生物反應信號放大系統，檢測速度快、靈敏度高、線性范圍寬、檢測結果重復性好，能夠實現血液中AChE?Ab的準確定量檢測。

技術領域

本發明涉及一種檢測AChE-Ab的電化學發光試劑盒及用法，屬于免疫分析技術領域。

背景技術

重癥肌無力(myasthenia gravis,MG)是一種自身免疫性疾病，它是一種自身抗體介導、補體參與、細胞免疫依賴的神經肌肉接點(NMJ)處神經遞質的信號傳遞障礙。MG人群發病率為(32～64)/10萬，我國目前約有60萬MG患者[1]。其主要臨床表現為骨骼肌無力、易疲勞，活動后加重，休息和應用膽堿酯酶抑制劑后癥狀明顯緩解、減輕。其特點是發病率高、致殘率高、預后差、易復發，已經嚴重威脅到人類的生活和健康，得到了醫療、科研工作者的廣泛關注。MG是典型的抗體介導的自身免疫性疾病，主要靶抗原是NMJ突觸后膜的乙酰膽堿受體(AChR)。但抗AChR抗體并非存在于所有的MG患者中，且其與病情嚴重程度、是否合并胸腺瘤和發病年齡無關。

乙酰膽堿(ACh)是一種神經遞質，主要在運動神經終末處合成，其作用為傳導神經沖動。乙酰膽堿酯酶(AChE)廣泛分布于人的神經組織，其主要功能是催化膽堿能神經末梢釋放的ACh的水解，維持正常的神經活動。任何一種因素影響到突觸結構都會導致膽堿能神經元功能的不完整，如抗乙酰膽堿酯酶抗體(AChE-Ab)與突觸部位的AChE結合，造成AChE失活，阻礙ACh水解，ACh持續作用于突觸后膜，使突觸后膜處于去極化狀態不能恢復，而影響下一次的神經活動的傳遞[2]。Lennon等發現將AChE作為靶抗原，把抗乙酰膽堿酯酶的抗體注入大鼠體內，通過組織化學及形態學檢查，發現AChE活性降低引發了臨床癥狀的產生[3]。MG患者中有13％血清中為AChE-Ab陽性，且多為AChR-Ab陰性，臨床多見眼肌型MG[4]。

目前AChE-Ab的主要檢測方法還是ELISA檢測，該方法具有靈敏度低，重現性差，操作繁瑣等多個缺點。建立高靈敏度、高特異性的檢測AChE-Ab方法是尚待解決的問題。電化學發光免疫分析法是繼酶聯免疫分析、放射免疫分析、熒光免疫分析之后的新一代標記免疫測定技術，具有高度敏感、特異性強、測定范圍寬、試劑穩定、操作簡單等優點。目前尚未有文獻報道電化學發光免疫分析法檢測AChE-Ab的研究。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：為解決現有技術中尚未有高靈敏度、高特異性的定量檢測AChE-Ab的方法或試劑盒的技術問題，提供一種檢測AChE-Ab的電化學發光試劑盒及制法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種檢測AChE-Ab的電化學發光試劑盒，包括：包被鏈霉親和素的磁珠微粒工作液，生物素標記的AChE工作液，三聯吡啶釕標記的抗人IgG抗體工作液，AChE-Ab的校準品和/或質控品工作液，含三丙胺的電化學發光底物液，以及清洗液。

優選地，所述包被鏈霉親和素的磁珠微粒工作液由pH為6.8～7.6，濃度為0.01mol/L～0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、HEPES緩沖液、MOPSO緩沖液中的一種配制而成，所述緩沖液含有0.05～1wt％的BSA(牛血清白蛋白)和/或酪蛋白、0.05～1wt％的Brij-35(月桂醇聚氧乙烯醚)和/或Triton X-100(聚乙二醇對異辛基苯基醚)和/或Tween-20(山梨醇酐單月桂酸酯聚氧乙烯醚)、0.05～0.5wt％的proclin 300或疊氮化鈉。

優選地，所述抗人IgG抗體為單克隆抗體、多克隆抗體、單克隆抗體Fab片段或多克隆抗體Fab片段，優選來源于鼠、兔、羊。