[發(fā)明專利]一種無標記細胞膜受體GPR88的細胞篩選模型及應用

在審

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• 申請日: 2019-12-20
• 公開（公告）號: CN113005089A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發(fā)明（設計）人: 梁鑫淼;侯滔;王紀霞;薛珍珍;單彩龍;王俊
• 申請（專利權）人: 泰州醫(yī)藥城國科化物生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12Q1/02
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 蔡天敏

本發(fā)明涉及無標記G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）的細胞篩選模型構建方法及應用，具體地說是一種無標記細胞膜受體GPR88的細胞篩選模型。本發(fā)明基于無標記細胞整合藥理學技術，利用GPR88穩(wěn)定表達的細胞系，建立了篩選GPR88受體激動劑和拮抗劑的方法。此方法還可用于研究影響受體下游通路的調節(jié)劑。本發(fā)明構建的GPR88細胞篩選模型不需熒光標記且檢測過程無需額外添加指示劑，具有靶點?通路整合響應、對細胞無損傷、檢測結果可靠、靈敏度高、篩選通量高、周期短及操作簡便等特點。其用于從天然產物庫、代謝產物庫及組合化學庫中尋找GPR88受體的激動劑、拮抗劑和通路調節(jié)劑，及GPR88受體密切相關的中樞神經系統(tǒng)疾病，如精神分裂、帕金森病、焦慮癥、抑郁癥、藥物成癮等精神疾病的藥物篩選。

技術領域

本發(fā)明涉及無標記GPCR細胞篩選模型的構建方法，具體地說是一種無標記細胞膜受體GPR88的細胞篩選模型及應用。

背景技術

G蛋白偶聯(lián)受體（G-protein-coupled receptors, GPCRs）是七次跨膜受體，其數(shù)量高達800個，介導從血壓調節(jié)到無數(shù)重要的生理和病理過程，因此是小分子藥物開發(fā)中最受關注的藥物靶點[Allen, J. A., et al., Annual Review of Pharmacology andToxicology 2011, 51, 117?144.]。目前FDA批準的約40％的藥物靶標為GPCRs，而且這些藥物靶向的GPCRs只占總GPCRs的20%，還有大量的GPCRs，尤其是孤兒G蛋白偶聯(lián)受體（orphan G-protein-coupled receptors, oGPCRs）依然未得到開發(fā)和利用[Rask-Andersen, M., et al., Nature Reviews Drug Discovery 2011, 10, 579?590；Wold,E. A., et al., Journal of Medicinal Chemistry 2019, 62(1), 88-127；Lu, S. etal., Journal of Medicinal Chemistry 2019, 62(1), 24-45；Topiol, S., Methods inMolecular Biology 2018, 1705, 1?21；Hauser, A. S., et al., Nature Reviews DrugDiscovery 2017, 16, 829?842；Chung, S., et al., British Journal ofPharmacology 2008, 153 (S1), S339；Fang, Y., et al., Frontiers in Pharmacology2015, 6, 295；Kroeze, W. K., et al., Nature Structural Molecular Biology2015, 22, 362?369.]。G蛋白偶聯(lián)受體-88（GPR88），是GPCRs家族的一員，在紋狀體、尾狀核、伏隔核和嗅結節(jié)中表達，其中樞神經系統(tǒng)在紋狀體中的表達特別強，與多巴胺D2受體的表達相當[Mizushima, K. , et al., Genomics 2000, 69, 314.]。研究表明，GPR88涉及調節(jié)各種大腦和行為功能，包括認知，情緒，運動控制和基于獎勵的學習，因此正成為治療中樞神經系統(tǒng)疾病（包括精神分裂癥、帕金森氏病、焦慮癥、抑郁癥和成癮癥等精神疾病）的新型藥物靶標，但是目前GPR88的內源性配體仍然未知[Massart, R., et al., EuropeanJournal of Neuroscience 2009, 30, 397?414；Jin, C. Y. , et al., Acs ChemicalNeuroscience 2014, 5(7), 576-587；Jin, C. Y. , et al., Acs ChemicalNeuroscience 2016, 7(10), 1418-1432；Ye, N., et al., Acs Chemical Neuroscience2019, 10(1), 190-200]。鑒于GPR88對于中樞神經系統(tǒng)疾病的巨大治療潛力，構建GPR88受體的細胞篩選模型，用以發(fā)現(xiàn)GPR88受體的內源性配體、高活性激動劑、拮抗劑及通路調節(jié)劑，對揭示GPR88的生物學功能和藥理學特征，以及推進中樞神經系統(tǒng)疾病新型靶標藥物的發(fā)展具有重大意義。