[發(fā)明專利]一種無標(biāo)記細(xì)胞膜受體GPR88的細(xì)胞篩選模型及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911326663.1
• 申請(qǐng)日: 2019-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN113005089A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁鑫淼;侯滔;王紀(jì)霞;薛珍珍;單彩龍;王俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 泰州醫(yī)藥城國科化物生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12Q1/02
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32249
• 代理人: 蔡天敏

1.一種無標(biāo)記細(xì)胞膜受體GPR88的細(xì)胞篩選模型，其特征在于：基于無標(biāo)記細(xì)胞整合藥理學(xué)技術(shù)，利用穩(wěn)定表達(dá)GPR88的細(xì)胞系HEK293T-GPR88，借助于已知的GPR88受體的配體，建立GPR88受體的細(xì)胞篩選模型。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種無標(biāo)記細(xì)胞膜受體GPR88的細(xì)胞篩選模型，其特征在于：在細(xì)胞兼容的具有光學(xué)生物傳感功能的384微孔板中接種HEK293T-GPR88細(xì)胞，接種的細(xì)胞密度為1.0 ~ 4.5×10⁴個(gè)/孔，細(xì)胞培養(yǎng)液體積為40 μL/孔，接種后細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間為18 ~24 h。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種無標(biāo)記細(xì)胞膜受體GPR88的細(xì)胞篩選模型，其特征在于：具體包括以下步驟：

[1] 將溶解在HBSS緩沖鹽中的GPR88受體激動(dòng)劑2-PCCA以濃度為2.4 ~ 20000 nM加入到接種HEK293T-GPR88細(xì)胞的384微孔板中，檢測(cè)其DMR特征信號(hào)譜；

[2] 再向步驟[1]中加入了GPR88受體激動(dòng)劑2-PCCA的細(xì)胞板中繼續(xù)加入與具有最高響應(yīng)強(qiáng)度對(duì)應(yīng)的最低濃度（EC₁₀₀）的2-PCCA，檢測(cè)脫敏DMR特征信號(hào)譜；

[3] 獲得的所有DMR特征信號(hào)譜具有濃度-響應(yīng)依賴關(guān)系且具有靈敏性、飽和性及特異性的特點(diǎn)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種無標(biāo)記細(xì)胞膜受體GPR88的細(xì)胞篩選模型，其特征在于：待測(cè)樣品具有激動(dòng)活性的篩選步驟如下：

[1] 將溶解在HBSS緩沖鹽中的GPR88受體激動(dòng)劑2-PCCA以濃度為2.4 ~ 20000nM加入到接種HEK293T-GPR88細(xì)胞的384微孔板中，檢測(cè)其DMR特征信號(hào)譜；

[2] 將待測(cè)樣品以0.01 nM ~ 100 μM加入到接種HEK293T-GPR88細(xì)胞的微孔板中，檢測(cè)其DMR信號(hào)譜；

[3] 關(guān)聯(lián)分析步驟[1]和步驟[2]中的DMR信號(hào)譜，若步驟[2]的DMR信號(hào)譜與[1]中的DMR特征譜具有輪廓相似性；

[4] 向步驟[2]中加入了待測(cè)樣品的細(xì)胞板中繼續(xù)加入與步驟[1]中相同濃度的2-PCCA，檢測(cè)DMR信號(hào)譜；若此DMR信號(hào)比步驟[1]中2-PCCA的信號(hào)弱；

[5] 向步驟[1]加入了GPR88受體激動(dòng)劑2-PCCA的384微孔板中，繼續(xù)加入與步驟[2]中相同濃度的待測(cè)樣品，檢測(cè)其DMR信號(hào)，若此DMR信號(hào)強(qiáng)度低于步驟[2]中的DMR信號(hào)強(qiáng)度，則判斷此樣品為GPR88受體的激動(dòng)劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種無標(biāo)記細(xì)胞膜受體GPR88的細(xì)胞篩選模型，其特征在于：待測(cè)樣品具有拮抗活性的篩選步驟如下：

[1] 將待測(cè)樣品和GPR88受體激動(dòng)劑2-PCCA分別加入到接種HEK293T-GPR88細(xì)胞的微孔板中，待測(cè)樣品濃度為0.01 nM ~ 100 μM，2-PCCA濃度為2.4 ~ 20000 nM，檢測(cè)DMR信號(hào)譜；

[2] 若步驟[1]中待測(cè)樣品不引起DMR信號(hào)譜，再向步驟[1]中加入了待測(cè)樣品的細(xì)胞板中繼續(xù)加入與步驟[1]中相同濃度的2-PCCA，檢測(cè)DMR信號(hào)譜；若此DMR信號(hào)比步驟[1]中2-PCCA的信號(hào)弱，可判斷待測(cè)樣品是GPR88受體的拮抗劑。