[發明專利]一種具有防治香蕉枯萎病功能的芽孢桿菌及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201911326529.1
• 申請日: 2019-12-20
• 公開（公告）號: CN111172060A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 寸海春;何月秋;趙崇鈞;許濤;趙枝超;彭嘉誠;毛明林;李誠;張麗芳
• 申請（專利權）人: 云南省微生物發酵工程研究中心有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P3/00;C12R1/125
• 代理公司: 昆明鴻昊知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 53211
• 代理人: 方正巧

本發明公開了一種具有防治香蕉枯萎病功能的芽孢桿菌及其制備方法和應用，所述的芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌YX?11。所述的枯草芽孢桿菌是通過培養材料準備、分離培養、拮抗內生細菌篩選和拮抗內生細菌YX?11的鑒定步驟得到的。所述的枯草芽孢桿菌YX?11的菌劑，是以所述的枯草芽孢桿菌YX?11經種子液一級制備、種子液二級制備和發酵得到的菌劑。所述的枯草芽孢桿菌YX?11的菌劑的制備方法，包括一級種子液制備、二級種子液制備和發酵液制備步驟。所述枯草芽孢桿菌YX?11為活性成分的制劑綠色環保無殘留，不僅對香蕉枯萎病具有顯著的防治作用，而且對植株生長具有促進作用。

技術領域

本發明屬于芽孢桿菌微生物分離培養技術領域，具體涉及一種具有防治香蕉枯萎病功能的芽孢桿菌及其制備方法和應用。

背景技術

香蕉枯萎病是由尖孢鐮刀菌古巴專化型引起的一種維管束真菌性土傳病害，會導致根和莖吸收傳導養分受阻，生長不良、萎蔫、矮化，產量和品質受損，以致減產，嚴重的導致絕產，該病對世界香蕉產業造成嚴重危害和經濟損失。目前香蕉枯萎病的發病面積正在逐步加大，由于常規藥劑對香蕉枯萎病防治效果不理想，防治比較困難，目前尚無防治香蕉枯萎病的特效藥劑，已成為香蕉產業發展的瓶頸，嚴重地制約了香蕉生產與發展。由于化學藥劑和物理防控對于病害的防治效果較差，基于生物產業的快速發展，采用農用微生物菌劑進行枯萎病的防控，既能避免作物產生抗藥性，又能實現綠色環保無殘留，所以研制一株高效防香蕉枯萎病的功能菌株及其制成的防控產品對于香蕉產業的健康持續發展尤為重要。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種安全、環保、防治效果顯著的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)YX-11；第二目的在于提供所述的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)YX-11的制備方法；第三目的在于提供所述的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)YX-11的菌劑；第四目的在于提供所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)YX-11菌劑的制備方法；第五目的在于提供枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)YX-11菌劑在防治香蕉枯萎病方面的應用。

本發明的第一目的是這樣實現的：一種具有防治香蕉枯萎病功能的芽孢桿菌，所述的芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)YX-11，所述枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)YX-11的保藏單位為：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日為：2019年09月02日，保藏編號為：CGMCCNo.18456。

本發明的第二目的是這樣實現的：一種具有防治香蕉枯萎病功能的芽孢桿菌YX-11的制備方法，包括以下步驟

1)培養材料準備：

選擇采摘健康、無病害香蕉植株的香蕉葉片備用；

將LB固體培養基和PDA培養基融化，分別倒入滅菌培養皿，冷卻，制成LB培養基平板和PDA培養基平板；其中，LB培養基平板用于分離和保存內生細菌，PDA培養基平板用于培養香蕉枯萎病菌和對峙培養；

2)分離培養：

取香蕉葉片經酒精消毒后，用滅菌水沖洗3～5次，置于滅菌的研缽中研磨成汁，將研磨得到的汁液涂布于LB培養基平板上；隨機挑取形態不同的菌落進行純化培養并保存，將純化培養所得的其中一株菌株命名為YX-11；

3)拮抗內生細菌篩選：

以香蕉枯萎病菌為指示菌，將挑選出的菌株YX-11采用PDA平板對峙培養法培養，在培養過程中觀察菌株YX-11對香蕉枯萎病菌的抑菌作用，并測定其抑菌帶寬度大??；

4)拮抗內生細菌YX-11的鑒定：