[發明專利]一株枯草芽孢桿菌及其在生產γ-聚谷氨酸中的應用

有效

• 申請號: 201911316883.6
• 申請日: 2019-12-19
• 公開（公告）號: CN110904012B
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發明（設計）人: 孫元軍;陸震;魏玉潔;陳雯雯;石艷麗;欒貽宏;郭學平
• 申請（專利權）人: 華熙生物科技股份有限公司;山東華熙海御生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P13/02;C12R1/125
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 賈波

1.一株枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）NT-11，其保藏號為CCTCC NO：M 2019383。

2.權利要求1所述的枯草芽孢桿菌NT-11在生產γ-聚谷氨酸中的應用。

3.一種γ-聚谷氨酸的發酵生產方法，其特征是：以權利要求1所述的枯草芽孢桿菌NT-11為菌種，通過發酵法制得γ-聚谷氨酸。

4.一種γ-聚谷氨酸的發酵生產方法，其特征是：以權利要求1所述的枯草芽孢桿菌NT-11為發酵菌種，包括菌種活化、種子培養和發酵培養的步驟，發酵培養時，將種子液接種于發酵培養基中，通氣攪拌進行發酵培養，當發酵液pH下降至5.5~6.0時，控制pH一直維持在5.5~6.0，同時向發酵培養基中開始補加氯化鈉和谷氨酰胺，使氯化鈉在發酵培養基中的終濃度保持在1~3g/L、谷氨酰胺在發酵培養基中的終濃度保持在3~5g/L，直至發酵結束。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征是：所述發酵培養基的組成為：葡萄糖80~120g/L、谷氨酰胺30~80g/L、蛋白胨5~25g/L、硫酸鎂0.1~1g/L、磷酸氫二鉀0.5~2g/L、pH6.5~8.0，水余量。

6.根據權利要求4或5所述的方法，其特征是：當發酵液pH下降至5.5~6.0時，向發酵體系中加入堿，使后續發酵pH一直保持在5.5~6.0的范圍內。

7.根據權利要求4或5所述的方法，其特征是：發酵培養初期，在300~600r/min的攪拌轉速、0.01~0.03Mpa的罐壓、0.5~1.0vvm的通氣量、35~38℃的溫度下進行發酵，當pH下降至5.5~6.0時，控制pH一直維持在5.5~6.0，同時調高攪拌轉速、罐壓和通氣量，使攪拌轉速為600~1000r/min、罐壓為0.03~0.05Mpa、通氣量為1.0~1.5vvm，直至發酵結束。

8.根據權利要求4所述的方法，其特征是：種子液的接種量為5~15wt%。

9.根據權利要求4所述的方法，其特征是：菌種活化和種子培養包括以下步驟：

菌種活化：在無菌條件下，將枯草芽孢桿菌菌株劃線接種于平板培養基上，35~38℃活化培養20~48h，待長出單菌落后，挑取單菌落接種于試管斜面培養基上，35~38℃活化培養20~48h，得到活化完全的試管斜面種子；

種子培養：在無菌條件下，挑取活化完全的試管斜面種子，接種于種子培養基中，在150~200r/min 的轉速、35~38℃的溫度下震蕩培養20~40h，得種子液。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征是：平板培養基及試管斜面培養基的組成均為：葡萄糖5~20g/L、谷氨酸鈉5~20g/L、蛋白胨5~20g/L、硫酸鎂0.1~1g/L、磷酸氫二鉀0.1~1g/L、瓊脂18~22g/L、pH6.0~8.0、水余量。

11.根據權利要求9所述的方法，其特征是：種子培養基的組成為：葡萄糖5~20g/L、谷氨酸鈉5~20g/L、蛋白胨5~20g/L、硫酸鎂0.1~0.5g/L、磷酸氫二鉀0.1~0.5g/L、pH6.0~8.0、水余量。

12.根據權利要求4所述的方法，其特征是：發酵培養所得的發酵液通過以下方法得到γ-聚谷氨酸產品：將發酵液醇沉，所得沉淀用水溶解，離心取上清液，調整上清液pH為4~5，在50~80℃加熱吸附1~2h，然后過濾除雜，所得濾液醇沉、干燥，得γ-聚谷氨酸粉末。