[發明專利]一種基于口腔干細胞的芯片的制備方法

在審

• 申請號: 201911316877.0
• 申請日: 2019-12-19
• 公開（公告）號: CN111004774A
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 雷童;杜宏武
• 申請（專利權）人: 康妍葆（北京）干細胞科技有限公司
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074;C40B50/06;C12Q1/02
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 劉俊玲

本發明屬于干細胞芯片技術領域，具體涉及一種基于口腔干細胞的芯片的制備方法。該制備方法包括如下步驟：S1細胞爬片的制備分別將6種口腔干細胞的單細胞懸液接種于細胞基片的各分區框內培養至細胞貼在細胞基片上，隨后加入培養基覆蓋；取出細胞爬片，用沖洗液沖洗后固定、重溶得6種口腔干細胞細胞懸液；S2細胞芯片的制備將6種口腔干細胞細胞懸液與點樣液混合后加入到標準細胞培養板中進行點樣后培養，即可制成；其中，所述6種口腔干細胞為DPSCs，SHED，SCAP，PDLSCs，DFSCs和GMSCs。本發明提供的制備方法制得的細胞芯片具有穩定性好、可重復性好、檢測準確性高的優點。

技術領域

本發明屬于干細胞芯片技術領域，具體涉及一種基于口腔干細胞的芯片的制備方法。

背景技術

成體細胞由于其無倫理特性以及可自體提取和移植的特點，被廣泛研究。而口腔組織由神經嵴分化而來，組織中分離得到的干細胞，不僅具有成體干細胞的優點，還具成神經樣細胞的特點，而且還具有免疫原性低的優點，成為應用于臨床的良好材料。

牙髓干細胞(DPSCs)被從成年人第三磨牙DPSCs在Eagle’s培養基中顯示成纖維樣細胞形態，集落形成的發生率比骨髓干細胞(BMSCs)更高，表明在牙髓來源干細胞比骨髓來源干細胞有更好的生長潛力。從7-8歲兒童身上收集正常脫落的門牙，分離組織，消化后將單細胞懸液放置于常規培養基中培養，并將由并得到的細胞并為脫落并牙干細胞(SHED)。第三磨牙的根尖并頭中分離出具有干細胞特性的細胞群，與載體羥基磷灰石/磷酸鈣(HA/TCP)結合后，實現了免疫缺陷小鼠的牙本質再生，他們將這種細胞群并為根尖并頭干細胞(SCAP)。牙周膜中分離得到的單細胞懸液，能夠表達MSC標志物，在特殊培養條件下分化成牙本質細胞，脂肪細胞和膠原細胞，并且在移植后能夠幫助嚙齒修復牙周，于是他們將其命名為牙周膜干細胞(PDLSCs)。人牙囊組織中提取細胞，成功分離后，發現其IGF-2比hMSC中表達高100多倍，得到牙囊干細胞(DFSCs)。人牙齦組織中有著MSC細胞成為GMSCs。牙胚組織分離得到新的干細胞，被命名為牙胚細胞(TGPCs)。通過手術從6-44歲患者體內獲得牙槽骨，分離得到牙槽骨干細胞(ABMSCs)。

眾所周知，中國人的口腔問題很嚴重。人們不健康的生活及衛生習慣導致日常生活中常有牙周炎、牙齦出血、齲齒、口腔潰瘍等狀況。由于牙齒干細胞的優秀的成牙本質細胞特性，常常被作為一種牙科組織工程的再生材料。口腔是一個復雜的環境，炎性反應以及微生物的存在，讓口腔細胞受到多種刺激從而具有一些優良的功能比如抑制微生物生長。牙科干細胞也可以被用作一種疾病藥物測試的模型。另外，由于從組織中原代分離得到的細胞是一個高度異質性的混合細胞群，干細胞來源的穩定性直接限制了其應用。相對應的，干細胞膜表面標志物的研究的開展能有效解決這個問題。但是來源于口腔中不同部位、不同組織的干細胞不論是在標志物表征還是在功能特性方面，依然具有比較大差異。

現有研究是直接將干細胞單獨分離后，分別研究或者進行平行研究，這導致結果的穩定性差，可重復性差。且單獨分離細胞培養，因為細胞不能隨時保存，有分化、老化甚至細胞死亡的風險，所以每次檢測一種細胞基礎數據指標，都需要從頭開始繁瑣的細胞實驗操作，每種細胞逐項指標檢測，不僅耗費大量時間，還浪費大量試劑。需要一種集合了多種口腔干細胞的微型化的、高效的多細胞平臺，去除細胞實驗組別的差異，在同一系統中進行干細胞分化、表征、異質性以及藥物測試等研究。

細胞芯片技術是在一張載玻片上檢測數十或上百個病人樣本，與各種生物檢測技術結合可以低成本高效率地檢測多種疾病指標。

但截止目前，還仍未見有任何關于口腔干細胞芯片的相關報道。

發明內容

為了解決現有技術中存在的上述問題，本發明提供了一種基于口腔干細胞的芯片的制備方法。

為了實現上述發明目的，本發明提供了如下技術方案：

一種基于口腔干細胞的芯片的制備方法，其包括如下步驟：