[發明專利]一種基于口腔干細胞的芯片的制備方法

在審

• 申請號: 201911316877.0
• 申請日: 2019-12-19
• 公開（公告）號: CN111004774A
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 雷童;杜宏武
• 申請（專利權）人: 康妍葆（北京）干細胞科技有限公司
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074;C40B50/06;C12Q1/02
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 劉俊玲

1.一種基于口腔干細胞的芯片的制備方法，其包括如下步驟：

S1細胞爬片的制備

分別將6種口腔干細胞的單細胞懸液接種于細胞基片的各分區框內培養至細胞貼在細胞基片上，隨后加入培養基覆蓋；

取出細胞爬片，用沖洗液沖洗后固定、重溶得6種口腔干細胞細胞懸液；

S2細胞芯片的制備

將6種口腔干細胞細胞懸液與點樣液混合后加入到標準細胞培養板中進行點樣后培養，即可制成；

其中，所述6種口腔干細胞為DPSCs，SHED，SCAP，PDLSCs，DFSCs和GMSCs。

2.根據權利要求1所述的制備方法，步驟S1中所述細胞基片為三維基片，其中由固相基片表面修飾一層極薄的含活化醛基的三維結構高分子聚合物。

3.根據權利要求1所述的制備方法，所述制備方法中采用的培養基為含有10％胎牛血清和1％的青/鏈霉素雙抗的α-MEM培養基。

4.根據權利要求1所述的制備方法，步驟S1中6種口腔干細胞的單細胞懸液經由如下步驟制得：分別培養6種口腔干細胞待生長至80-90％亞匯合狀態，用胰酶消化細胞，培養液吹打后轉移到離心管，離心去掉上層培養液，加入新鮮培養基重懸沉淀得6種口腔干細胞的單細胞懸液。

5.根據權利要求1所述的制備方法，步驟S1中固定所采用的固定液為4％多聚甲醛，固定時間為15-30min。

6.根據權利要求1所述的制備方法，步驟S2中口腔干細胞細胞懸液與點樣液混合時的比例為1:1-3。

7.根據權利要求1所述的制備方法，步驟S2中芯片點樣濕度40-50％，優選為50％；洗針條件為超純水流洗10S、超聲10S、抽干10S，共4個循環。

8.根據權利要求1所述的制備方法，步驟S2點樣儀的參數設置為：300mm，40個預點樣，單矩陣內為6×10，包含每個樣點10個，多矩陣為2×3。

9.根據權利要求1所述的制備方法，步驟S1中所述的細胞基片在接種之前進行如下處理：

將均勻分區后的細胞基片依次用水洗、濃酸浸泡、水洗后濕法滅菌。