[發(fā)明專利]一種外周血中的腫瘤細(xì)胞株數(shù)量的檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911305883.6
• 申請日: 2019-12-18
• 公開（公告）號: CN111458514A
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王琦;曾勇
• 申請（專利權(quán)）人: 王琦;曾勇
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/64;G01N15/14;G01N1/28;C12Q1/6841
• 代理公司: 北京華科聯(lián)合專利事務(wù)所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為;孟旭

本發(fā)明為腫瘤細(xì)胞檢測提供一個可靠的內(nèi)控質(zhì)量控制方法，在精確的知道檢測技術(shù)上限的同時準(zhǔn)確的計算出細(xì)胞的回收率而得出整體循環(huán)腫瘤細(xì)胞的數(shù)目，極大的提升檢測的可信度。本發(fā)明所述的方法，包括以下步驟：1)外周血樣本的獲得，2)向外周血樣本注入已知數(shù)目的腫瘤細(xì)胞株及仿真人工合成熒光圓珠，3)采用以下技術(shù)對外周血腫瘤細(xì)胞進(jìn)行富集，4)顯微鏡下辨認(rèn)及計數(shù)余下的腫瘤細(xì)胞株及熒光圓珠，得出細(xì)胞株及熒光圓珠的富集率。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及一種外周血中的腫瘤細(xì)胞株數(shù)量的檢測方法。

背景技術(shù)：

日常如果發(fā)現(xiàn)患有腫瘤的癥狀時，需及早診斷，及時治療；早診斷的方法包括，檢測外周血中的腫瘤細(xì)胞株數(shù)量。

現(xiàn)有技術(shù)公開了外周血中的腫瘤細(xì)胞富集方法，如：

Peter Ping Lin,Olivier Gires,Daisy Dandan Wang,Linda LiHongxia Wang(2017)Comprehensive in situ co-detection of aneuploid circulating endothelialand tumor cells.Sci Rep 7:9789□文獻(xiàn)，公開了如何全面的檢測到循環(huán)腫瘤細(xì)胞和異倍體上皮細(xì)胞。

P.Lin(2015)Integrated EpCAM-independent subtraction enrichment andiFISH strategies to detect and classify disseminated and circulating tumorscells.Clin Transl Med 4(38):1-7□文獻(xiàn)。公開了如何利用非EpCAM依賴性的負(fù)向方法檢測及歸類循環(huán)腫瘤細(xì)胞。

Q.Chen,F.Ge,W.Cui,F.Wang,Z.Yang,Y.Guo,L.Li,R.Bremner,and P.Lin(2013)Lung Cancer Circulating Tumor Cells Isolated by the EpCAM-IndependentEnrichment Strategy Correlate with Cytokeratin 19-Derived CYFRA21-1 andPathological Staging.Clin Chim Acta 419:57-61□文獻(xiàn)，公開了使用非EpCAM依賴性方法富集及檢測肺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞。

但現(xiàn)有技術(shù)的缺陷在于，沒法知道捕獲到的細(xì)胞占整體腫瘤細(xì)胞總數(shù)的比例和準(zhǔn)確數(shù)目，無法定量。

目前需要提供定量數(shù)據(jù)，并制定一種捕獲到的腫瘤細(xì)胞占整體腫瘤細(xì)胞總數(shù)的比例的標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)，判斷腫瘤細(xì)胞的發(fā)生，發(fā)展，治療效果等，可用于腫瘤的檢測，排除假陽性，判斷藥物的治療效果。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明為腫瘤細(xì)胞檢測提供一個可靠的內(nèi)控質(zhì)量控制方法，在精確的知道檢測技術(shù)上限的同時準(zhǔn)確的計算出細(xì)胞的回收率而得出整體循環(huán)腫瘤細(xì)胞的數(shù)目，極大的提升檢測的可信度。

本發(fā)明的檢測方法，步驟如下：

同時加入已知數(shù)目的細(xì)胞株及仿真人工合成熒光圓珠，完成整個富集流程后，在顯微鏡下辨認(rèn)及計數(shù)余下的細(xì)胞株及熒光圓珠，得出細(xì)胞株及熒光圓珠的富集率。經(jīng)過多次實驗證實熒光珠與細(xì)胞株的富集率高度一致并可以替代細(xì)胞株作為檢測的可靠質(zhì)量內(nèi)控。

本發(fā)明所述的檢測方法，包括以下步驟：

1)外周血樣本的獲得

採用體表淺靜脈負(fù)壓采血法抽取靜脈血。首先消毒，左手拇指固定穿刺血管下端，右手拇指和中指持負(fù)壓采血針，食指固定針頭下座，使針頭斜面和刻度朝上，以30度角方向沿靜脈方向刺入皮膚，然后以5度角方向進(jìn)入血管，見回血后在蝴蝶針的另一端插入真空採血管，讓負(fù)壓抽取6mL血。