[發明專利]一株硫酸多粘菌素B單克隆抗體雜交瘤細胞株及其應用

在審

• 申請號: 201911305855.4
• 申請日: 2019-12-18
• 公開（公告）號: CN110923208A
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發明（設計）人: 胥傳來;李月;匡華;徐麗廣;馬偉;劉麗強;吳曉玲;宋珊珊;胡擁明
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/12;C07K7/62;G01N33/68;C12R1/91
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;張仕婷

1.一株硫酸多粘菌素B單克隆抗體雜交瘤細胞株OVA17，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，分類命名為單克隆細胞株，保藏日期2019年10月14日，保藏編號CGMCCNo.18516。

2.硫酸多粘菌素B單克隆抗體，其特征在于：它由權利要求1所述保藏編號為CGMCCNo.18516的硫酸多粘菌素B單克隆抗體雜交瘤細胞株OVA17分泌產生。

3.權利要求2所述硫酸多粘菌素B單克隆抗體的應用，其特征在于：用于食品安全檢測中硫酸多粘菌素B殘留的分析檢測。

4.權利要求1所述雜交瘤細胞株OVA17的制備方法，其特征在于：其通過硫酸多粘菌素B的完全抗原免疫小鼠后，經過培養篩選出小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞兩種細胞融合后的雜交細胞；再經過間接競爭酶聯免疫法篩選細胞并三次亞克隆，得到雜交瘤細胞株OVA17。

5.根據權利要求4所述雜交瘤細胞株OVA17的制備方法，其特征在于所述硫酸多粘菌素B的完全抗原的制備過程如下：采用硫酸多粘菌素B，即PMB作為硫酸多粘菌素B半抗原，隨后采用雙功能交聯劑6-(馬來酰亞胺基)己酸琥珀酰亞胺酯GMBS將PMB半抗原與載體蛋白偶聯以制備硫酸多粘菌素B的完全抗原。

6.根據權利要求5所述雜交瘤細胞株OVA17的制備方法，其特征在于所述PMB的結構式如下：

。

7.根據權利要求5所述雜交瘤細胞株OVA17的制備方法，其特征在于所述硫酸多粘菌素B的完全抗原的制備具體為：稱取PMB 14mg，加入1.5 mL 0.1M PBS溶解，充分溶解后向其中加入0.5 mL溶有2.8 mg GMBS的四氫呋喃溶液，并于30℃攪拌30 min；氮吹除去四氫呋喃，再用3 mL乙醚-二氯甲烷混合溶液洗滌多次，除去多余的GMBS，最終獲得PMB-GMBS溶液，即A液；取10mg BSA，溶解于0.2 mL 0.1M PBS中，并加入50 μL現配的0.5M羥胺溶液，25℃攪拌10 min后加入3mL含3M尿素的0.1M PBS緩沖液稀釋，獲得B液；將B液立即加入到A液中，并于25℃劇烈攪拌30min；混合液用0.01M PBS溶液透析，除去未反應的小分子半抗原，得到完全抗原PMB-GMBS-BSA，并通過紫外吸收掃描方法進行鑒定。

8.根據權利要求7所述雜交瘤細胞株OVA17的制備方法，其特征在于：所述乙醚-二氯甲烷混合溶液為，乙醚：二氯甲烷的體積比為2：1。