[發(fā)明專利]用于熒光定量PCR檢測CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201911299218.0 | 申請日： | 2019-12-16 |
| 公開（公告）號： | CN110819709A | 公開（公告）日： | 2020-02-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 刁久玲;翟瑞雪;智慧芳;倪君君 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京和合醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6883 | 分類號： | C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京雙收知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11241 | 代理人： | 解政文 |
| 地址： | 101111 北京市大興區(qū)經(jīng)*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 熒光 定量 pcr 檢測 cyp2c9 vkorc1 基因 多態(tài)性 方法 | ||
1.一種用于熒光定量PCR檢測CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性的引物探針組合，其特征在于，包括三組引物和雙探針，其中：
第一組引物探針的核苷酸序列：上游引物由SEQ ID NO.1所示，下游引物由SEQ IDNO.2所示，熒光探針1由SEQ ID NO.3所示，熒光探針2由SEQ ID NO.4所示；第二組引物探針的核苷酸序列：上游引物由SEQ ID NO.5所示，下游引物由SEQ ID NO.6所示，熒光探針1由SEQ ID NO.7所示，熒光探針2由SEQ ID NO.8所示；第三組引物探針的核苷酸序列：上游引物由SEQ ID NO.9所示，下游引物由SEQ ID NO.10所示，熒光探針1由SEQ ID NO.11所示，熒光探針2由SEQ ID NO.12所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物探針組合，其特征在于，所述CYP2C9基因多態(tài)性包括CYP2C9基因的CYP2C9*2位點(diǎn)、CYP2C9*3位點(diǎn)；所述VKORC1基因多態(tài)性包括VKORC1基因-1639A＞G位點(diǎn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的引物探針組合，其特征在于，所述三組的熒光探針在5′末端區(qū)域標(biāo)記有熒光基團(tuán)，在3′末端區(qū)域標(biāo)記有淬滅基團(tuán)，各組中的熒光探針1和熒光探針2的熒光基團(tuán)均不相同。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的引物探針組合，其特征在于，所述熒光基團(tuán)選自FAM、TET、VIC、ROX、Texas Red-X、Cy3、Cy5；淬滅基團(tuán)選自TAMRA、BHQ、DABCYL、NFQ-MGB。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的引物探針組合，其特征在于，所述三組的熒光探針，熒光探針1的5′端標(biāo)記有FAM的熒光基團(tuán)，熒光探針2的5′端標(biāo)記有VIC熒光基團(tuán)，所有熒光探針的3′端均標(biāo)記有NFQ-MGB的淬滅基團(tuán)。
6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的引物探針組合應(yīng)用于制備熒光定量PCR檢測CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性的試劑盒中。
7.一種用于熒光定量PCR檢測CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性的試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的引物探針組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，還包含DNA聚合酶、緩沖液、尿嘧啶DNA糖基酶、含dUTP的dNTPs和超純水。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，還包含待測樣品DNA提取試劑或DNA提取試劑盒。
10.一種用于熒光定量PCR檢測CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性的檢測方法，其特征在于，采用權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的引物探針組合對待測樣品進(jìn)行熒光定量PCR檢測，包括步驟：
(1)從待測樣品中提取基因組DNA，作為擴(kuò)增模板；
(2)配制包含所述引物探針組合和所述擴(kuò)增模板的熒光定量PCR反應(yīng)體系，各反應(yīng)體系中，上下游引物的終濃度均為0.2-1.0μM；熒光探針的終濃度均為0.05-1.0μM；
(3)熒光PCR擴(kuò)增反應(yīng)，條件：90-98℃，預(yù)變性，5-20min；94-98℃變性10-50s；55-69℃，退火60-90s；68-72℃，延伸15-300s；30-50個(gè)循環(huán)；
(4)基因型判讀：
方法一：擴(kuò)增完成后，根據(jù)擴(kuò)增曲線呈S型或類似S型，且Ct≤30，判斷實(shí)驗(yàn)是否成功；再根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)判斷基因型：純合型(突變、野生)：一條曲線Ct≤30，且曲線呈S型或類似S型；另外一條曲線Ct＞30，或無曲線產(chǎn)生；雜合型：兩條曲線均Ct≤30，且曲線呈S型或類似S型；
方法二：擴(kuò)增完成后，根據(jù)散點(diǎn)圖自動(dòng)讀取基因型，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)樣品，每個(gè)數(shù)據(jù)集代表一種基因型：純合野生型、雜合突變型、純合突變型。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于北京和合醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)股份有限公司，未經(jīng)北京和合醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)股份有限公司許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201911299218.0/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
