[發明專利]一種負載生長因子的復合緩釋微粒及其制備方法

在審

• 申請號: 201911297658.2
• 申請日: 2019-12-17
• 公開（公告）號: CN110801513A
• 公開（公告）日: 2020-02-18
• 發明（設計）人: 石銳;周新欽;曹晶晶;張明;楊帥;張建鑫;王川
• 申請（專利權）人: 河南匯博醫療股份有限公司
• 主分類號: A61K38/18
• 分類號: A61K38/18;A61K9/52;A61K47/42;A61K47/36;A61P17/02
• 代理公司: 鄭州先風知識產權代理有限公司 41127
• 代理人: 趙蘭花

本發明公開了一種負載生長因子的復合緩釋微粒的制備方法，包括以下步驟：由膠原蛋白和殼聚糖組成膠原蛋白?殼聚糖支架，由殼聚糖和彈性蛋白重組體組成包裹生長因子的微型膠囊，將所述微型膠囊嵌合在所述膠原蛋白?殼聚糖支架上制備得到產品。本發明提供一種負載生長因子的復合緩釋微粒的制備方法，首先制備得到具有三維折疊結構的膠原蛋白?殼聚糖支架，該支架的孔隙中嵌合包裹生長因子的多層微型膠囊，對其中包裹的生長因子具有長時勻速的緩釋作用，從而實現生長因子主動誘導缺損處組織修復。本發明還提供了一種負載生長因子的復合緩釋微粒，具有良好的生物相容性、生物降解性和極低的免疫原性，使生長因子具有長時間，均勻的釋放。

技術領域

本發明涉及一種復合緩釋微粒，尤其涉及一種負載生長因子的復合緩釋微粒及其制備方法。

背景技術

目前，富血小板血漿(Platelet-rich plasma，簡稱PRP)，是自體全血經離心后得到的血小板濃縮物，PRP中含有大量生長因子及蛋白質，廣泛應用于臨床：骨關節的修復、大面積燒傷皮膚的修復以及醫美整形等領域中。

膠原蛋白是細胞外基質(ECM)的主要成份，屬于結構蛋白質，約占哺乳動物蛋白質總質量的1/3，大量存在于皮膚、韌帶、軟骨、肌鍵等結締組織或器官中。膠原具有良好的生物相容性，植入體內無毒副作用和刺激性，不易引起機體免疫反應，而且也有利于細胞的黏附、增殖和分化，加快創面愈合，并可降解而為新生組織提供足夠的空間，廣泛應用于生物材料的研究和開發利用中。但是單一材料存在著生物活性、強度等問題。

殼聚糖是一種天然堿性聚合電解質多糖，具有良好的生物相容性和抗菌活性，并且價格低廉。殼聚糖表面帶有正電荷，能夠吸附帶負電的紅細胞而誘導其聚集，進一步促進血小板凝血，因此被廣泛應用于傷口止血和抗菌領域。

現有的負載生長因子的膠原蛋白-殼聚糖微粒作用于人體，被激活后1小時內達到90％的釋放，在體外作用3天左右，在體內5天左右凋亡，作用時效短且集中，不利于持續調動和補充生長因子對創面進行修復。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的之一在于提供一種負載生長因子的復合緩釋微粒的制備方法，制備工藝條件溫和，原料易得。

本發明的目的之二在于提供一種負載生長因子的復合緩釋微粒，具有良好的生物相容性、生物降解性和極低的免疫原性，對其中包裹的生長因子具有長時勻速的緩釋作用，從而實現生長因子主動誘導缺損處組織修復。

本發明的目的之一采用如下技術方案實現：

一種負載生長因子的復合緩釋微粒的制備方法，包括以下步驟：由膠原蛋白和殼聚糖組成膠原蛋白-殼聚糖支架，由殼聚糖和彈性蛋白重組體組成包裹生長因子的微型膠囊，將所述微型膠囊嵌合在所述膠原蛋白-殼聚糖支架上制備得到產品。

進一步地，所述微型膠囊的制備過程如下：

(1)制備彈性蛋白重組體和殼聚糖的混合溶液：取彈性蛋白重組體和中分子量殼聚糖按1：1的比例進行混合，中分子量殼聚糖的分子量為300-400KDa，脫乙酰度75-85％，用氯化鈉溶液溶解；

(2)制備包裹生長因子的碳酸鈣微粒：在生長因子溶液中先加入碳酸鈉溶液，再加入標記生長因子的熒光素，最后加入氯化鈣溶液，攪拌后沉淀一段時間，去除上清液，洗滌后得到包裹生長因子的碳酸鈣微粒；

(3)將上述步驟(2)的包裹生長因子的碳酸鈣微粒浸入到上述步驟(1)的混合溶液中，重復進行浸泡、洗滌過程，采用懸浮沉淀法去除上清液，得到由彈性蛋白重組體和殼聚糖包裹生長因子的微型膠囊。

進一步地，所述膠原蛋白-殼聚糖支架的制備過程如下：將膠原蛋白和低分子量殼聚糖分別配置成溶液，混合后攪拌至溶液不透明，超聲去除氣泡，將混合溶液冷凍后凍干，將凍干后的固體放入交聯劑中浸泡交聯，洗去交聯劑，冷凍后凍干，即得膠原蛋白-殼聚糖支架。