[發(fā)明專利]一種負(fù)載生長(zhǎng)因子的復(fù)合緩釋微粒及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911297658.2
• 申請(qǐng)日: 2019-12-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110801513A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石銳;周新欽;曹晶晶;張明;楊帥;張建鑫;王川
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南匯博醫(yī)療股份有限公司
• 主分類號(hào): A61K38/18
• 分類號(hào): A61K38/18;A61K9/52;A61K47/42;A61K47/36;A61P17/02
• 代理公司: 鄭州先風(fēng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41127
• 代理人: 趙蘭花

本發(fā)明公開(kāi)了一種負(fù)載生長(zhǎng)因子的復(fù)合緩釋微粒的制備方法，包括以下步驟：由膠原蛋白和殼聚糖組成膠原蛋白?殼聚糖支架，由殼聚糖和彈性蛋白重組體組成包裹生長(zhǎng)因子的微型膠囊，將所述微型膠囊嵌合在所述膠原蛋白?殼聚糖支架上制備得到產(chǎn)品。本發(fā)明提供一種負(fù)載生長(zhǎng)因子的復(fù)合緩釋微粒的制備方法，首先制備得到具有三維折疊結(jié)構(gòu)的膠原蛋白?殼聚糖支架，該支架的孔隙中嵌合包裹生長(zhǎng)因子的多層微型膠囊，對(duì)其中包裹的生長(zhǎng)因子具有長(zhǎng)時(shí)勻速的緩釋作用，從而實(shí)現(xiàn)生長(zhǎng)因子主動(dòng)誘導(dǎo)缺損處組織修復(fù)。本發(fā)明還提供了一種負(fù)載生長(zhǎng)因子的復(fù)合緩釋微粒，具有良好的生物相容性、生物降解性和極低的免疫原性，使生長(zhǎng)因子具有長(zhǎng)時(shí)間，均勻的釋放。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種復(fù)合緩釋微粒，尤其涉及一種負(fù)載生長(zhǎng)因子的復(fù)合緩釋微粒及其制備方法。

背景技術(shù)

目前，富血小板血漿(Platelet-rich plasma，簡(jiǎn)稱PRP)，是自體全血經(jīng)離心后得到的血小板濃縮物，PRP中含有大量生長(zhǎng)因子及蛋白質(zhì)，廣泛應(yīng)用于臨床：骨關(guān)節(jié)的修復(fù)、大面積燒傷皮膚的修復(fù)以及醫(yī)美整形等領(lǐng)域中。

膠原蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的主要成份，屬于結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)，約占哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)總質(zhì)量的1/3，大量存在于皮膚、韌帶、軟骨、肌鍵等結(jié)締組織或器官中。膠原具有良好的生物相容性，植入體內(nèi)無(wú)毒副作用和刺激性，不易引起機(jī)體免疫反應(yīng)，而且也有利于細(xì)胞的黏附、增殖和分化，加快創(chuàng)面愈合，并可降解而為新生組織提供足夠的空間，廣泛應(yīng)用于生物材料的研究和開(kāi)發(fā)利用中。但是單一材料存在著生物活性、強(qiáng)度等問(wèn)題。

殼聚糖是一種天然堿性聚合電解質(zhì)多糖，具有良好的生物相容性和抗菌活性，并且價(jià)格低廉。殼聚糖表面帶有正電荷，能夠吸附帶負(fù)電的紅細(xì)胞而誘導(dǎo)其聚集，進(jìn)一步促進(jìn)血小板凝血，因此被廣泛應(yīng)用于傷口止血和抗菌領(lǐng)域。

現(xiàn)有的負(fù)載生長(zhǎng)因子的膠原蛋白-殼聚糖微粒作用于人體，被激活后1小時(shí)內(nèi)達(dá)到90％的釋放，在體外作用3天左右，在體內(nèi)5天左右凋亡，作用時(shí)效短且集中，不利于持續(xù)調(diào)動(dòng)和補(bǔ)充生長(zhǎng)因子對(duì)創(chuàng)面進(jìn)行修復(fù)。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的之一在于提供一種負(fù)載生長(zhǎng)因子的復(fù)合緩釋微粒的制備方法，制備工藝條件溫和，原料易得。

本發(fā)明的目的之二在于提供一種負(fù)載生長(zhǎng)因子的復(fù)合緩釋微粒，具有良好的生物相容性、生物降解性和極低的免疫原性，對(duì)其中包裹的生長(zhǎng)因子具有長(zhǎng)時(shí)勻速的緩釋作用，從而實(shí)現(xiàn)生長(zhǎng)因子主動(dòng)誘導(dǎo)缺損處組織修復(fù)。

本發(fā)明的目的之一采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種負(fù)載生長(zhǎng)因子的復(fù)合緩釋微粒的制備方法，包括以下步驟：由膠原蛋白和殼聚糖組成膠原蛋白-殼聚糖支架，由殼聚糖和彈性蛋白重組體組成包裹生長(zhǎng)因子的微型膠囊，將所述微型膠囊嵌合在所述膠原蛋白-殼聚糖支架上制備得到產(chǎn)品。

進(jìn)一步地，所述微型膠囊的制備過(guò)程如下：

(1)制備彈性蛋白重組體和殼聚糖的混合溶液：取彈性蛋白重組體和中分子量殼聚糖按1：1的比例進(jìn)行混合，中分子量殼聚糖的分子量為300-400KDa，脫乙酰度75-85％，用氯化鈉溶液溶解；

(2)制備包裹生長(zhǎng)因子的碳酸鈣微粒：在生長(zhǎng)因子溶液中先加入碳酸鈉溶液，再加入標(biāo)記生長(zhǎng)因子的熒光素，最后加入氯化鈣溶液，攪拌后沉淀一段時(shí)間，去除上清液，洗滌后得到包裹生長(zhǎng)因子的碳酸鈣微粒；

(3)將上述步驟(2)的包裹生長(zhǎng)因子的碳酸鈣微粒浸入到上述步驟(1)的混合溶液中，重復(fù)進(jìn)行浸泡、洗滌過(guò)程，采用懸浮沉淀法去除上清液，得到由彈性蛋白重組體和殼聚糖包裹生長(zhǎng)因子的微型膠囊。

進(jìn)一步地，所述膠原蛋白-殼聚糖支架的制備過(guò)程如下：將膠原蛋白和低分子量殼聚糖分別配置成溶液，混合后攪拌至溶液不透明，超聲去除氣泡，將混合溶液冷凍后凍干，將凍干后的固體放入交聯(lián)劑中浸泡交聯(lián)，洗去交聯(lián)劑，冷凍后凍干，即得膠原蛋白-殼聚糖支架。