[發明專利]一種負載生長因子的復合緩釋微粒及其制備方法

在審

• 申請號: 201911297658.2
• 申請日: 2019-12-17
• 公開（公告）號: CN110801513A
• 公開（公告）日: 2020-02-18
• 發明（設計）人: 石銳;周新欽;曹晶晶;張明;楊帥;張建鑫;王川
• 申請（專利權）人: 河南匯博醫療股份有限公司
• 主分類號: A61K38/18
• 分類號: A61K38/18;A61K9/52;A61K47/42;A61K47/36;A61P17/02
• 代理公司: 鄭州先風知識產權代理有限公司 41127
• 代理人: 趙蘭花

1.一種負載生長因子的復合緩釋微粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：由膠原蛋白和殼聚糖組成膠原蛋白-殼聚糖支架，由殼聚糖和彈性蛋白重組體組成包裹生長因子的微型膠囊，將所述微型膠囊嵌合在所述膠原蛋白-殼聚糖支架上制備得到產品。

2.根據權利要求1所述一種負載生長因子的復合緩釋微粒的制備方法，其特征在于，所述微型膠囊的制備過程如下：

(1)制備彈性蛋白重組體和殼聚糖的混合溶液：取彈性蛋白重組體和中分子量殼聚糖按1：1的比例進行混合，中分子量殼聚糖的分子量為300-400KDa，脫乙酰度75-85％，用氯化鈉溶液溶解；

(2)制備包裹生長因子的碳酸鈣微粒：在生長因子溶液中先加入碳酸鈉溶液，再加入標記生長因子的熒光素，最后加入氯化鈣溶液，攪拌后沉淀一段時間，去除上清液，洗滌后得到包裹生長因子的碳酸鈣微粒；

(3)將上述步驟(2)的包裹生長因子的碳酸鈣微粒浸入到上述步驟(1)的混合溶液中，重復進行浸泡、洗滌過程，采用懸浮沉淀法去除上清液，得到由彈性蛋白重組體和殼聚糖包裹生長因子的微型膠囊。

3.根據權利要求2所述一種負載生長因子的復合緩釋微粒的制備方法，其特征在于，所述膠原蛋白-殼聚糖支架的制備過程如下：將膠原蛋白和低分子量殼聚糖分別配置成溶液，混合后攪拌至溶液不透明，超聲去除氣泡，將混合溶液冷凍后凍干，將凍干后的固體放入交聯劑中浸泡交聯，洗去交聯劑，冷凍后凍干，即得膠原蛋白-殼聚糖支架。

4.根據權利要求3所述一種負載生長因子的復合緩釋微粒的制備方法，其特征在于，將膠原蛋白-殼聚糖支架溶解后，加入由彈性蛋白重組體和殼聚糖包裹生長因子的微型膠囊進行浸泡，凍干，即得產品。

5.根據權利要求1所述一種負載生長因子的復合緩釋微粒的制備方法，其特征在于，所述彈性蛋白重組體的制備過程如下：采用基因重組技術制備重組大腸桿菌BLR(DE3)表達彈性蛋白重組體，其中誘導溫度為25℃，pH為7.0，溶氧為30％；以5g·5L^-1·5h^-1流速流加葡萄糖，收獲培養物，通過超聲破碎進行裂解，離心除去不溶性殘渣，并將澄清的裂解物進行冷熱循環離心，然后冷凍干燥，即得彈性蛋白重組體。

6.根據權利要求3所述一種負載生長因子的復合緩釋微粒的制備方法，其特征在于，將膠原蛋白和殼聚糖分別溶解在3％的乙酸水溶液中，形成質量濃度分別為2-5％的膠原蛋白溶液和2-5％的殼聚糖溶液，混合時，膠原蛋白溶液和殼聚糖溶液的體積比為1:2-5。

7.根據權利要求3所述一種負載生長因子的復合緩釋微粒的制備方法，其特征在于，所述低分子量殼聚糖的分子量為100-200KDa，脫乙酰度為80-90％。

8.根據權利要求1所述一種負載生長因子的復合緩釋微粒的制備方法，其特征在于，所述生長因子為轉化生長因子-β和血小板衍生生長因子-AB中的至少一種。

9.根據權利要求1所述一種負載生長因子的復合緩釋微粒的制備方法，其特征在于，所述膠原蛋白-殼聚糖支架的平均孔徑為140-160um，包裹生長因子的殼聚糖-彈性蛋白重組體微型膠囊的平均直徑為7-10um。

10.一種負載生長因子的復合緩釋微粒，其特征在于，由權利要求1至9任一項所述方法制備得到。