[發明專利]一種復蘇植物墊狀卷柏的組培繁殖方法

有效

• 申請號: 201911296273.4
• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN110800617B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 余蓉培;汪國鮮;浦艷飛;李帆;盧珍紅;莫錫君
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院花卉研究所;玉溪云星生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 云南凌云律師事務所 53207
• 代理人: 康珉

一種復蘇植物墊狀卷柏的組培繁殖方法。該方法包括：墊狀卷柏無菌外植體的獲得、原生芽的誘導、不定芽的增殖以及組培苗壯苗和生根培養。本發明成功以復蘇植物墊狀卷柏幼嫩枝條尖端為外植體，構建了墊狀卷柏組培繁殖體系，不定芽的增殖率達8倍以上，組培苗壯苗和生根培養過程中的單個不定芽的再次增殖率達11倍以上，1個墊狀卷柏幼嫩枝條尖端在170～175天內可以擴繁得到88株以上的組培苗，獲得了較高的繁殖效率，為墊狀卷柏的規模化擴繁奠定了良好的基礎，對復蘇植物墊狀卷柏的野生種群保護和資源開發利用具有重要意義。

技術領域

本發明屬植物繁殖領域，具體涉及一種復蘇植物墊狀卷柏的組培繁殖方法。

背景技術

墊狀卷柏[Selaginella pulvinata(Hook.Grev)Maxim.]，隸屬于卷柏科(Selaginellaceae)卷柏屬，呈墊狀，主莖不呈匍匐狀，主要生長于裸露的石灰巖表面或石縫，生長環境較為干旱。墊狀卷柏俗稱“九死還魂草”，是典型的復蘇植物，具有極強的耐脫水特性，能在極端脫水的情況下通過較低的新陳代謝保持長期生存，水分條件適宜時，能迅速恢復正常生長。墊狀卷柏因其神奇的復蘇特性成為一類特殊的觀賞植物資源。同時，墊狀卷柏含有黃酮、雙黃酮、炔酚等藥用成分，具有抗癌、抗病毒、抗氧化和降糖等功效，是重要的藥用植物資源。

墊狀卷柏為異形孢子蕨類，具有大孢子和小孢子，在濕潤環境中，大孢子發育成為具有頸卵器的雌配子體，小孢子發育成為具有精子器的雄配子體，在水環境下，精子器中的精子進入頸卵器中，與卵子結合形成受精卵，最終發育成為墊狀卷柏幼苗。然而，墊狀卷柏的生境較為干旱，僅雨季有短暫的濕潤期，不利于墊狀卷柏的孢子繁殖，難以形成孢子繁殖后代。連續野外調查發現，墊狀卷柏野外種群的自然繁殖率較低，種群內的個體數量沒有明顯增加。加之墊狀卷柏兼具觀賞和藥用價值，野生資源被大肆采掘，導致墊狀卷柏野外種群數量急劇減少，野生資源已經無法滿足當前的需求。

卷柏屬中，部分主莖匍匐狀的種類，如：小翠云，莖節處具有不定根，可以進行扦插繁殖，但墊狀卷柏的主莖不呈匍匐狀，極難進行扦插繁殖。此外，在前期研究中發現，墊狀卷柏組培過程中極容易產生褐化，組培繁殖難度較大。目前，尚未見關于復蘇植物墊狀卷柏相關繁殖技術的報道，亦未見復蘇植物墊狀卷柏的組培繁殖方法。

發明內容

為解決復蘇植物墊狀卷柏野生種群急劇減少、自然繁殖力低等問題，本發明提供一種復蘇植物墊狀卷柏的組培繁殖方法。

本發明所述的一種復蘇植物墊狀卷柏的組培繁殖方法，包括以下步驟：

(1)無菌外植體的獲得

選取野生墊狀卷柏植株的幼嫩枝條尖端作為外植體，經過消毒滅菌后，獲得無菌外植體；

(2)原生芽的誘導

將步驟(1)中獲得的無菌外植體接種在原生芽誘導培養基上，放置于20～25℃培養室中進行暗培養，暗培養周期為30～45天，所述原生芽誘導培養基為：1/2MS+6-BA 0.1～0.2mg/L+NAA 0.1～0.2mg/L+檸檬酸400～500mg/L+蔗糖30.0g/L+瓊脂7.0g/L，pH為5.80；

(3)不定芽的增殖

將步驟(2)中獲得的原生芽接種在不定芽增殖培養基上，放置于培養室中進行增殖培養，增殖培養的周期為50～60天，所述不定芽增殖培養基為：1/2MS+6-BA 0.8～1.0mg/L+NAA0.05～0.1mg/L+蔗糖30.0g/L+瓊脂7.0g/L，pH為5.80；所述增殖培養環境條件為：20～25℃,光照強度為30～40μmol·m^-2·s^-1，每天光照時間為16小時；

(4)組培苗壯苗和生根培養