[發明專利]一種枸杞多糖的摻雜鑒別及含量檢測方法

有效

• 申請號: 201911296099.3
• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN110927286B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 李文德;陳尚衛;楊浩;戴軍;陳安平;徐一達
• 申請（專利權）人: 浙江尖峰健康科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 彭啟強

1.一種枸杞多糖的摻雜鑒別方法，其特征在于：包括以下步驟，

A1、對枸杞進行多糖提取，包括脫脂、熱水浸提、醇沉和干燥，得到枸杞多糖粗品，稱重得到M1；

A2、將枸杞多糖粗品用超純水溶解，并混勻、過濾，得到預檢液；

A3、在預檢液中加入復合糖化酶進行酶解，酶解后殺酶得到酶解液，將酶解液中加入無水乙醇，振搖后靜置，離心，取沉淀加水溶解，過濾后得到多糖水溶解液；

A4、將多糖水溶解液進行水解及衍生反應，得到進樣液；

A5、對進樣液進行色譜分析，通過測量半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和氨基葡萄糖的峰面積百分比，進行摻雜鑒別；

A6、通過測量半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和氨基葡萄糖的峰面積百分比得到枸杞多糖總百分比，乘以M1和校正系數0.9后得到枸杞多糖的含量；

所述步驟A5中，進行摻雜鑒別的方法為：半乳糖、阿拉伯糖和氨基葡萄糖的峰面積相對百分比分別小于7％、14％和0.60％，且葡萄糖相對百分比大于63％，則初步判定摻雜有糊精或可溶性淀粉；

將枸杞經步驟A1和A2處理后，直接將預檢液利用步驟A4的水解及衍生反應，再色譜分析，得到葡萄糖的峰面積百分比P2，若步驟A5中的葡萄糖百分比相較P2相對比例降低大于等于10％，則判定摻雜有糊精或可溶性淀粉；

所述步驟A1中枸杞多糖的提取包括以下步驟：

B1、脫脂：按質量份數，取100份枸杞粉碎，加入到300份的有機溶劑中脫脂、過濾，將過濾后濾渣干燥，用質量濃度80％的乙醇300份回流得到殘渣，將殘渣干燥；

B2、熱水浸提：在步驟B1的殘渣中加入90℃蒸餾水回流提取，收集得到枸杞的多糖提取液，將多糖提取液進行抽濾，濾液進行減壓濃縮，得到多糖水濃提液；

B3、醇沉：將步驟B2中得到的多糖水濃提液置入無水乙醇中沉淀，抽濾后得到濾餅，將濾餅分別以質量濃度95％的乙醇、無水乙醇和丙酮進行洗滌，再真空干燥，得到枸杞多糖粗品。

2.根據權利要求1所述的一種枸杞多糖的摻雜鑒別方法，其特征在于：所述步驟B1中有機溶劑為石油醚或者氯仿與石油醚混合溶劑。

3.根據權利要求2所述的一種枸杞多糖的摻雜鑒別方法，其特征在于：所述步驟A4中的水解及衍生反應包括以下步驟，

C1、取100μL質量濃度為4-5g/L的多糖水溶解液于5mL的具塞刻度試管中，加入100μL的4mol/L的TFA，充N₂封管，于110℃烘箱中水解2h；

C2、冷卻后加200mL甲醇，再用N₂吹干，重復加200mL甲醇并用N₂吹3次，去除TFA；

C3、加入50μL 0.3mol/L NaOH溶液充分溶解殘渣，再加50μL、0.5mol/L的PMP甲醇溶液，漩渦混勻，在70℃的烘箱中反應100min；

C4、冷卻后中和、萃取，并用微孔膜過濾，其濾液用微孔過濾膜過濾后，得到進樣液。

4.根據權利要求3所述的一種枸杞多糖的摻雜鑒別方法，其特征在于：所述步驟C4中，所述中和步驟為：加50μL0.3 mol/L的HCL中和，所述萃取步驟為：加50μL0.3 mol/L的HCL中和，加水至1mL，再加等體積的氯仿，振搖，靜置，棄去氯仿相；所述萃取次數為3次。

5.根據權利要求4所述的一種枸杞多糖的摻雜鑒別方法，其特征在于：所述步驟A5中色譜分析的色譜柱為ZORBAX Eclipse XDB-C18柱、流動相為0.1mol/L磷酸鹽緩沖液和乙腈的混合液、柱溫為30℃、檢測波長為250nm、流速為1mL/min、進樣體積為20μL。

6.根據權利要求5所述的一種枸杞多糖的摻雜鑒別方法，其特征在于：所述磷酸鹽緩沖液與乙腈混合液的體積比為磷酸鹽緩沖液：乙腈＝83:17。