[發(fā)明專利]一種用于評價LAG3抗體的生物學活性的方法及其試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911295821.1
• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN112986574B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發(fā)明（設計）人: 張嬋;張先鵬;李凡;施荷
• 申請（專利權）人: 廣東菲鵬制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 覃蛟

本發(fā)明公開了一種用于評價LAG3抗體的生物學活性的方法及其試劑盒，涉及LAG3抗體活性檢測技術領域。具體而言，該用于評價LAG3抗體的生物學活性的方法包括將表達LAG3蛋白的T淋巴瘤細胞和表達MHCII的細胞的混合產(chǎn)物與待評價LAG3抗體共孵育，檢測孵育產(chǎn)物中細胞因子的表達量。該方法僅需要構建一種穩(wěn)定表達LAG3蛋白的細胞株，體系構建時間短且穩(wěn)定性好，能夠有效檢測LAG3抗體的活性。

技術領域

本發(fā)明涉及LAG3抗體活性檢測技術領域，具體而言，涉及一種用于評價LAG3抗體的生物學活性的方法及其試劑盒。

背景技術

LAG3(Lymphocyte?Activation?Gene-3，淋巴細胞活化基因3，也稱作CD223)是一種I型跨膜免疫球蛋白超基因家族成員。其能與MHC?II類分子(組織相容性復合物II類分子)結合，負向調(diào)節(jié)免疫反應。通過研發(fā)抑制LAG3與MHC?II分子結合的LAG3抗體，可上調(diào)免疫反應，增強細胞的抗腫瘤能力。

現(xiàn)有技術多采用超抗原葡萄球菌腸毒素(SEB)刺激健康人PBMC分泌細胞因子，或者通過異體T-DC混合淋巴細胞反應來評價抗人LAG3(hLAG3)抗體的體外生物學活性。但這兩種技術均需要采集健康人外周血以用于分離外周血淋巴細胞PBMC，或需要進一步獲得誘導分化后的DC細胞及分離高純度的T細胞，實驗材料獲取困難，實驗流程復雜，并且因供者不同，實驗穩(wěn)定性較差。

目前，還可通過熒光素酶報告基因體系，通過檢測LAG3蛋白下游信號途徑的活化信號，以評價抗hLAG3抗體介導的MHC?II類分子的阻斷活性，但該方法需要花費大量的時間以構建兩種細胞株，即表達LAG3蛋白的穩(wěn)定細胞株和包含熒光素酶報告基因的穩(wěn)定細胞株，構建周期長，過程繁瑣。

鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明實施例的目的在于提供了一種用于評價LAG3抗體的生物學活性的方法及其試劑盒，該方法包括將表達LAG3蛋白的T淋巴瘤細胞和表達MHC?II的細胞的混合產(chǎn)物與待評價LAG3抗體共孵育，檢測孵育產(chǎn)物中細胞因子的表達量。

該試劑盒包括有表達LAG3蛋白的T淋巴瘤細胞和表達MHC?II的細胞。

本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明實施例提供的用于評價LAG3抗體的生物學活性的方法，僅需要構建一種穩(wěn)定表達LAG3蛋白的細胞株，體系構建時間短且穩(wěn)定性好，能夠有效檢測LAG3抗體的活性。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1為本發(fā)明實施例1中的Jurkat-hLAG3穩(wěn)定細胞株上hLAG3/CD3的比值結果；

圖2為本發(fā)明實施例2中Jurkat-hLAG3和Raji細胞共孵育后IL2的分泌結果；

圖3為本發(fā)明實施例2中14號克隆上hLAG3和CD3的表達情況；

圖4為本發(fā)明驗證例1中絲裂霉素C處理Raji細胞1～3天后Raji細胞的檢測結果，其中，圖4A為細胞存活率檢測結果，圖4B為活細胞密度檢測結果；

圖5為本發(fā)明驗證例2中加入不同外源刺激因子后IL2的檢測結果；

圖6為本發(fā)明驗證例3中不同Jurkat細胞與Raji細胞混合比例以及不同共孵育時間下IL2的檢測結果；

圖7為本發(fā)明驗證例4中不同的抗hLAG3抗體在評價體系中IL-2的表達情況；