[發(fā)明專利]一種轉(zhuǎn)座酶突變體、融合蛋白、其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911295765.1
• 申請(qǐng)日: 2019-12-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110938610B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張志毅;章瑞程;賀婷;杜翔斐;鐘淑瑤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東菲鵬生物有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/12
• 分類號(hào): C12N9/12;C12N15/54;C12N15/62;C07K19/00;C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06;G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

本發(fā)明公開(kāi)了一種轉(zhuǎn)座酶突變體、融合蛋白、其制備方法和應(yīng)用，涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，所述轉(zhuǎn)座酶突變體相較于野生型轉(zhuǎn)座酶具有至少一種突變形式，所述野生型轉(zhuǎn)座酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，該轉(zhuǎn)座酶突變體的穩(wěn)定性高，能長(zhǎng)期于?20℃的條件下儲(chǔ)存，可以顯著降低儲(chǔ)存成本，使轉(zhuǎn)座酶或其構(gòu)建的融合蛋白的使用更方便，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種轉(zhuǎn)座酶突變體、融合蛋白、其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著體外轉(zhuǎn)座相關(guān)技術(shù)的大量應(yīng)用，新型轉(zhuǎn)座酶的開(kāi)發(fā)和相關(guān)應(yīng)用也越來(lái)越多，用轉(zhuǎn)座酶介導(dǎo)的各種新型技術(shù)來(lái)替代舊技術(shù)的案例層出不窮。

轉(zhuǎn)座酶不僅可以應(yīng)用于一般的二代測(cè)序建庫(kù)過(guò)程，而且在多組學(xué)研究中的應(yīng)用也越來(lái)越廣泛。但現(xiàn)有的轉(zhuǎn)座酶蛋白存在一些缺陷，其蛋白穩(wěn)定性較差，于-20℃存放時(shí)，容易出現(xiàn)活性顯著降低或喪失的情況，需要相對(duì)苛刻的保存條件，通常將其與經(jīng)過(guò)專門設(shè)計(jì)序列的核酸共孵育形成復(fù)合體來(lái)提高其穩(wěn)定性，這種使用條件上的限制通常提高了實(shí)驗(yàn)本身的成本，并且增加了實(shí)驗(yàn)整體流程的復(fù)雜程度。

鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供轉(zhuǎn)座酶突變體、融合蛋白、分離的核酸、載體、宿主細(xì)胞、融合蛋白的制備方法、用于構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)的試劑盒、轉(zhuǎn)座酶突變體或融合蛋白在DNA建庫(kù)中的應(yīng)用以及融合蛋白在染色質(zhì)共沉淀中的應(yīng)用。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：

第一方面，實(shí)施例提供一種轉(zhuǎn)座酶突變體，所述轉(zhuǎn)座酶突變體相較于野生型轉(zhuǎn)座酶具有如下突變中的至少一種：R27T、M56G、Y41R、E190A、K120Q以及E146N；

所述野生型轉(zhuǎn)座酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

第二方面，實(shí)施例提供一種融合蛋白，其包括有上述轉(zhuǎn)座酶突變體。

第三方面，實(shí)施例提供一種分離的核酸，其編碼如前述實(shí)施例所述的轉(zhuǎn)座酶突變體或融合蛋白。

第四方面，實(shí)施例提供一種載體，其含有如前述實(shí)施例所述的分離的核酸。

第五方面，實(shí)施例提供一種宿主細(xì)胞，其含有如前述實(shí)施例所述的載體。

第六方面，實(shí)施例提供制備轉(zhuǎn)座酶突變體或融合蛋白的方法，其包括培養(yǎng)如前述實(shí)施例所述的宿主細(xì)胞。

第七方面，實(shí)施例提供一種用于構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)的試劑盒，其包括有如前述實(shí)施例所述的轉(zhuǎn)座酶突變體或融合蛋白。

第八方面，實(shí)施例提供一種前述實(shí)施例所述的轉(zhuǎn)座酶突變體或融合蛋白在DNA建庫(kù)中的應(yīng)用。

第九方面，實(shí)施例提供前述實(shí)施例所述的轉(zhuǎn)座酶突變體或融合蛋白在分析蛋白與染色質(zhì)的相互作用中的應(yīng)用。

本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明實(shí)施例提供的一種轉(zhuǎn)座酶突變體，該轉(zhuǎn)座酶突變體的穩(wěn)定性高，能夠長(zhǎng)期于-20℃的條件下儲(chǔ)存，可以顯著降低轉(zhuǎn)座酶的儲(chǔ)存成本，使轉(zhuǎn)座酶或其構(gòu)建的融合蛋白的使用更方便，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，應(yīng)當(dāng)理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實(shí)施例，因此不應(yīng)被看作是對(duì)范圍的限定，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。

圖1為本發(fā)明驗(yàn)證例1中轉(zhuǎn)座酶1與野生型轉(zhuǎn)座酶的穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果；

圖2為本發(fā)明驗(yàn)證例3中不同融合蛋白和多種酶標(biāo)抗體結(jié)合的效果。

具體實(shí)施方式