[發明專利]一種轉座酶突變體、融合蛋白、其制備方法和應用有效
| 申請號： | 201911295765.1 | 申請日： | 2019-12-16 |
| 公開（公告）號： | CN110938610B | 公開（公告）日： | 2020-12-01 |
| 發明（設計）人： | 張志毅;章瑞程;賀婷;杜翔斐;鐘淑瑤 | 申請（專利權）人： | 廣東菲鵬生物有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/12 | 分類號： | C12N9/12;C12N15/54;C12N15/62;C07K19/00;C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06;G01N33/68;G01N33/53 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 周文波 |
| 地址： | 523000 廣東省東莞市松山*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 轉座酶 突變體 融合 蛋白 制備 方法 應用 | ||
1.一種轉座酶突變體，其特征在于，所述轉座酶突變體相較于野生型轉座酶具有R27T突變；所述野生型轉座酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.根據權利要求1所述的轉座酶突變體，其特征在于，所述轉座酶突變體相較于所述野生型轉座酶具有如下(1)所示的突變組合；
(1)R27T和M56G。
3.一種融合蛋白，其特征在于，其包括權利要求1或2所述的轉座酶突變體；
所述融合蛋白還包括用于結合免疫球蛋白Fc段的結合蛋白，所述結合蛋白與所述轉座酶突變體相連。
4.根據權利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述結合蛋白包括金黃色葡萄球菌A蛋白、鏈球菌G蛋白和鏈球菌L蛋白中的至少一種。
5.根據權利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述結合蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo.2或3所示。
6.根據權利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述結合蛋白位于所述融合蛋白的氨基酸序列的N端，所述轉座酶突變體位于所述融合蛋白的氨基酸序列的C端。
7.根據權利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述結合蛋白與所述轉座酶突變體通過連接肽連接。
8.根據權利要求7所述的融合蛋白，其特征在于，所述連接肽為剛性連接肽或柔性連接肽。
9.根據權利要求7所述的融合蛋白，其特征在于，所述連接肽為柔性連接肽。
10.根據權利要求7所述的融合蛋白，其特征在于，所述連接肽的長度為6～59個氨基酸。
11.根據權利要求7所述的融合蛋白，其特征在于，所述連接肽的長度為20～35個氨基酸。
12.根據權利要求7所述的融合蛋白，其特征在于，所述連接肽的序列如SEQ ID No.4所示。
13.一種分離的核酸，其特征在于，其編碼如權利要求1或2所述的轉座酶突變體或如權利要求3～12任一項所述的融合蛋白。
14.一種載體，其特征在于，其含有如權利要求13所述的分離的核酸。
15.一種宿主細胞，其特征在于，其含有權利要求14所述的載體。
16.制備如權利要求1或2所述的轉座酶突變體或如權利要求3～12任一項所述的融合蛋白的方法，其特征在于，其包括培養如權利要求15所述的宿主細胞。
17.一種用于構建測序文庫的試劑盒，其特征在于，其包括如權利要求1或2所述的轉座酶突變體或如權利要求3～12任一項所述的融合蛋白。
18.如權利要求1或2所述的轉座酶突變體或如權利要求3～12任一項所述的融合蛋白在DNA建庫中的應用。
19.如權利要求1或2所述的轉座酶突變體或如權利要求3～12任一項所述的融合蛋白在分析蛋白與染色質的相互作用中的應用。
20.根據權利要求19所述的應用，其特征在于，所述應用包括孵育含有待分析的目標蛋白、目標染色質、以及所述轉座酶突變體的混合物體系。
21.根據權利要求20所述的應用，其特征在于，所述混合物體系還包括目標蛋白的抗體。
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