[發明專利]抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體及雜交瘤細胞株和其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201911295509.2
• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN111234022A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 徐恒
• 申請（專利權）人: 南京泰斯德生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N5/20;G01N33/574;G01N33/577;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32272
• 代理人: 王江南

1.一種雜交瘤細胞株，其特征在于：所述雜交瘤細胞株能夠分泌抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體，其保藏編號為CCTCC NO：C2019117。

2.如權利要求1所述的雜交瘤細胞株，其特征在于：所述雜交瘤細胞株是通過SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所述的三段序列通過蛋白重組表達出的三段N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶蛋白免疫小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞融合獲得。

3.一種抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體，其特征在于：所述單克隆抗體由權利要求1所述的雜交瘤細胞株分泌所得。

4.如權利要求3所述的抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體，其特征在于：所述抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體能夠識別并殺死腫瘤細胞，具有抑制腫瘤細胞的作用。

5.制備權利要求3所述的抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體的方法，其特征在于：包括，

三段重組蛋白片段的重組表達：分別對SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所述的三段序列進行基因片段擴增，然后對目的基因片段和蛋白表達載體pET 28a進行酶切連接，連接產物轉入大腸桿菌DH5α，挑取單克隆進行測序，將測序正確的陽性克隆提取質粒轉入大腸桿菌BL21中，IPTG誘導蛋白表達并純化，重組表達出三段N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶蛋白；

制備雜交瘤細胞株。

6.如權利要求5所述的制備抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體的方法，其特征在于：所述制備雜交瘤細胞株，其包括將所述三段N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶蛋白混合用脂質體顆粒包封，皮下多點注射加腹腔注射于Balb/c小鼠，注射3次，每次時間間隔為2周，第3次注射4天后，尾靜脈注射所述三段N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶蛋白混合劑；將免疫小鼠的脾細胞與Sp2/0骨髓瘤細胞融合得到雜交瘤細胞；篩選分泌抗體能力最強的陽性的雜交瘤細胞株進行克隆化，挑選單克隆細胞株并定株，定株后的雜交瘤細胞株擴大培養，純化，得到所述抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體。

7.如權利要求5所述的制備抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體的方法，其特征在于：所述進行基因片段擴增，其三段基因片段引物分別為：5’-GCCGACAGCACAGAACCAAC-3’、5’-GGTGGGACACAGACGGAGAG-3’；5’-GCAGGAAGCTCTGATGCATTATAA-3’、5’-ATGAAAAGCGCACCACTCGT-3’；5’-CACTTTTTTTATTGGTGATCATGCT-3’、5’-GTTCCATTGTGTATTGTTTGGTGTT-3’。

8.抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體在制備診斷或治療腫瘤制劑中的應用。