[發明專利]抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體及雜交瘤細胞株和其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201911295509.2
• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN111234022A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 徐恒
• 申請（專利權）人: 南京泰斯德生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N5/20;G01N33/574;G01N33/577;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32272
• 代理人: 王江南

本發明公開了抗N?乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體及雜交瘤細胞株和其制備方法與應用，所述雜交瘤細胞株能夠分泌抗N?乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體，其保藏編號為CCTCC NO：C2019117。其具有有效的抑制多種腫瘤細胞生長的活性，且直接殺死或殺傷腫瘤細胞，能夠應用于腫瘤的診斷和治療。

技術領域

本發明屬于生物醫藥工程技術領域，具體涉及抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體及雜交瘤細胞株和其制備方法與應用。

背景技術

糖蛋白的寡糖鏈參與了分子識別以及細胞與細胞間、細胞與間質間的識別、黏附和受體作用等多種生物功能。細胞癌變時癌細胞膜上糖蛋白的寡糖鏈發生改變，即糖基異?；?aberrantglycosylation)，各種異常的糖蛋白糖基可影響細胞的正常功能，如細胞的識別和黏附功能障礙，是導致細胞惡性轉化的分子基礎。N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶(O-GlcNAc，OGT)是一組參與天冬酰胺連接型(N-)聚糖合成加工的酶類，能將共同供體底物UDP-N-乙酰氨基葡萄糖 (UDP-GlcNAc)中的GlcNAc(Gn)糖基轉移至N-聚糖五糖核心的兩個甘露糖上。

O-GlcNAc糖基化是一種廣泛存在于蛋自質絲蘇氨酸殘基上的動態、可逆的蛋白質翻譯后修飾，廣泛分布在細胞漿和細胞核中，參與調節多種細胞途徑。在體內，O-GlcNAc動態修飾由N-乙酞氨基葡萄糖轉移酶(OGT)和N-乙酞氨基葡萄糖普酶(OGA)協同完成。N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶Ⅴ(GnTV)為糖蛋白N-糖鏈加工酶之一，起著決定N-糖鏈類型及復雜型糖鏈結構的重要作用。篩選能抑制腫瘤細胞生長或者能應用于腫瘤診斷的單克隆抗體是當前的迫切需要。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

作為本發明其中一個方面，本發明提供一種雜交瘤細胞株。

為解決上述技術問題，本發明提供了如下技術方案：一種雜交瘤細胞株，其中：所述雜交瘤細胞株能夠分泌抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體，其保藏編號為CCTCC NO：C2019117。

作為本發明所述的雜交瘤細胞株的一種優選方案：所述雜交瘤細胞株是通過SEQID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所述的三段序列通過蛋白重組表達出的三段N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶蛋白免疫小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞融合獲得。

作為本發明的另一個方面，本發明提供一種抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體。

為解決上述技術問題，本發明提供了如下技術方案：一種抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體，所述單克隆抗體由權利要求1所述的雜交瘤細胞株分泌所得。

作為本發明所述的抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體的一種優選方案：所述抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體能夠識別并殺死腫瘤細胞，具有抑制腫瘤細胞的作用。

作為本發明的另一個方面，本發明提供制備所述的抗N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶修飾的蛋白質單克隆抗體的方法，其包括，

三段重組蛋白片段的重組表達：分別對SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、 SEQ ID NO：3所述的三段序列進行基因片段擴增，然后對目的基因片段和蛋白表達載體pET 28a進行酶切連接，連接產物轉入大腸桿菌DH5α，挑取單克隆進行測序，將測序正確的陽性克隆提取質粒轉入大腸桿菌BL21中，IPTG誘導蛋白表達并純化，重組表達出三段N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶蛋白；

制備雜交瘤細胞株。