[發明專利]一種檢測非洲豬瘟CD2v蛋白抗體的ELISA方法、試劑盒及應用

在審

• 申請號: 201911293735.7
• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN110927390A
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發明（設計）人: 蔣智勇;李春玲;蔡汝健;郭怡德;宋帥;李艷;楚品品;勾紅潮;徐民生;卞志標
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院動物衛生研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/569
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞;裘暉

本發明公開了一種檢測非洲豬瘟CD2v蛋白抗體的ELISA方法、試劑盒及應用。該ELISA方法為雙抗原夾心法。通過該方法，獲得了檢測非洲豬瘟CD2v蛋白抗體的ELISA試劑盒，其包括辣根過氧化物酶標記的CD2v抗原和CD2v蛋白包被的酶標板。利用本發明設計的試劑盒不僅能大量篩查非洲豬瘟病毒抗體，還能用于鑒別CD2v缺失株免疫豬群中非洲豬瘟疫苗株與野毒株，檢測快速、靈敏，特異性好，非常適合非洲豬瘟疫情的大面積快速檢測普查，以及豬場將來進行非洲豬瘟的凈化與根除，應用前景廣闊。

技術領域

本發明屬于動物醫學動物疫病分子生物學診斷技術領域，具體涉及一種檢測非洲豬瘟CD2v蛋白抗體的ELISA方法、試劑盒及應用。

背景技術

非洲豬瘟(African swine fever,ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fevervirus，ASFV)感染家豬和野豬引起高致死率的高度接觸性傳染病。臨床上以高熱、內部器官廣泛出血、脾腫大且顏色因出血呈現黑色為主要特征。非洲豬瘟病毒基因型眾多，目前已知有24個基因型。迄今為止，該病尚無商品化的疫苗，疫情的防控主要依靠加強飼養場生物安全管理、限制生豬和豬產品跨區域流動、對發病動物采取清群撲殺等處置方式，常造成巨大經濟損失。世界動物衛生組織將非洲豬瘟列為法定報告的動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。

1921年，Montgomery首次報道在肯尼亞發生非洲豬瘟疫情。2007年以來，非洲豬瘟在中東歐多個國家擴散并流行，特別是俄羅斯及其周邊地區。2017年3月，俄羅斯遠東地區伊爾庫茨克州發生非洲豬瘟疫情，2018年8月，我國遼寧省沈陽市沈北區首次發現非洲豬瘟疫情，經核酸檢測和序列比對分析發現，該毒株與俄羅斯和中東歐國家流行的格魯吉亞毒株(Georgia 2007)屬于同一進化支，屬于基因II型毒株。隨后，在我國的河南、江蘇、內蒙古、黑龍江、浙江、安徽等多個省份(自治區、直轄市)呈現散發流行，對我國養豬業造成了數十億元的經濟損失，目前該病仍在蔓延之中。

由于ASF可給養豬業造成毀滅性打擊，故對于ASF疫苗的研究從未間斷過。迄今，國際上采用基因工程手段獲得了多個ASFV基因缺失疫苗候選株，并通過細胞傳代致弱和從自然界分離弱毒株的方法獲得了弱毒疫苗候選株，基因缺失株疫苗研究較多的是MGF和CD2v基因缺失株。國外2017年構建了CD2v缺失的BA71株(基因I型)已經充分致弱，免疫豬后存活率均100％(Monteagudo,P.L,et al.BA71DeltaCD2：a New Recombinant Live AttenuatedAfrican Swine Fever Virus with Cross-Protective Capabilities.J Virol,2017.91(21).)。2019年國內構建了CD2v和MGF雙基因缺失豬，可使免疫豬獲得100％的保護(張艷艷等，非洲豬瘟病毒基因缺失疫苗株的構建和免疫保護特性，中國獸醫學報，2019.39(8),1421-1427)。

專利CN102236017A公開了一種用于檢測非洲豬瘟病毒抗體的間接ELISA試劑盒及其用途，其以原核表達的重組蛋白為基礎，通過酶聯免疫技術研制一種檢測非洲豬瘟病毒抗體的間接ELISA試劑盒。然而，所述試劑盒僅能用于非洲豬瘟病毒抗體的大量篩選，并不能鑒別疫苗株與野毒株。因此，將來隨著疫苗的大量使用如何鑒別疫苗株與野毒株成為當務之急。

發明內容

本申請的首要目的在于提供一種檢測非洲豬瘟CD2v蛋白抗體的ELISA方法。

本發明的另一目的在于提供一種用于檢測非洲豬瘟病毒CD2v抗體的雙抗原夾心ELISA試劑盒。該試劑盒可用于非洲豬瘟病毒抗體的大量篩查以及用于鑒別CD2v缺失株免疫豬群中非洲豬瘟疫苗株與野毒株。

本發明的再一目的在于提供上述雙抗原夾心ELISA試劑盒在檢測非洲豬瘟病毒CD2v抗體中的應用。

本發明的上述目的，通過以下技術方案予以實現：