[發(fā)明專利]一種檢測非洲豬瘟CD2v蛋白抗體的ELISA方法、試劑盒及應用

在審

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• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN110927390A
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發(fā)明（設計）人: 蔣智勇;李春玲;蔡汝健;郭怡德;宋帥;李艷;楚品品;勾紅潮;徐民生;卞志標
• 申請（專利權）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學院動物衛(wèi)生研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/569
• 代理公司: 廣州市華學知識產(chǎn)權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞;裘暉

1.一種檢測非洲豬瘟CD2v蛋白抗體的ELISA方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)將重組的非洲豬瘟病毒CD2v蛋白包被于微孔板中，然后封閉，再于不同的微孔中加入待測樣本及標準陽性對照、陰性對照進行反應，洗板；

(2)接著加入HRP標記的CD2v抗原反應，洗板；再加入顯色液進行顯色反應，加入終止液終止反應；

(3)在450nm波長下，測定各孔吸光度值；根據(jù)測定結果，對待測樣本進行定性或定量的判斷。

2.根據(jù)權利要求1所述的檢測非洲豬瘟CD2v蛋白抗體的ELISA方法，其特征在于：

步驟(1)中所述的非洲豬瘟病毒CD2v蛋白的包被量為0.06μg/孔；

步驟(2)中所述的HRP標記的CD2v抗原的加入量為0.02μg/孔。

3.根據(jù)權利要求1所述的檢測非洲豬瘟CD2v蛋白抗體的ELISA方法，其特征在于：所述的定性判斷的標準如下：待檢血清樣本OD450>0.4，判為陽性，反之為陰性。

4.一種用于檢測非洲豬瘟病毒CD2v抗體的雙抗原夾心ELISA試劑盒，其特征在于：包括CD2v蛋白包被的酶標板和辣根過氧化物酶標記的CD2v抗原。

5.根據(jù)權利要求4所述的雙抗原夾心ELISA試劑盒，其特征在于：還包括底物顯色液、終止液、陽性對照、陰性對照、血清稀釋液和10倍濃縮洗滌液中的至少一種。

6.根據(jù)權利要求4或5所述的雙抗原夾心ELISA試劑盒，其特征在于：所述的CD2v蛋白包被的酶標板通過如下步驟制備得到：用pH9.6、0.05M的碳酸鹽緩沖液作為包被緩沖液，將濃度為0.6μg/L的CD2v蛋白溶液按100μL/孔加入空白酶標板中，4℃包被過夜；接著棄去包被液，按200μL/孔加入濃度為5％(w/v)的BSA溶液，4℃靜置12小時，洗滌甩干，室溫干燥后裝入包裝袋，加入干燥劑，真空保存。

7.根據(jù)權利要求5所述的雙抗原夾心ELISA試劑盒，其特征在于，所述的底物顯色液的組成如下：濃度為2mg/mL的四甲基聯(lián)苯乙醇溶液0.5mL，底物緩沖液10mL，0.75％H₂O₂，32μL；

其中，底物緩沖液的組成如下：濃度為0.2mol/L的Na₂HPO₄溶液25.7mL，濃度為0.1M的檸檬酸24.3mL，蒸餾水50mL。

8.根據(jù)權利要求5所述的雙抗原夾心ELISA試劑盒，其特征在于：

所述的陽性對照為CD2v抗體和含CD2v抗體的樣品中的至少一種；

所述的陰性對照為不含CD2v抗體的樣品。

9.權利要求1～8任一所述的雙抗原夾心ELISA試劑盒在檢測非洲豬瘟病毒CD2v蛋白抗體中的應用。

10.根據(jù)權利要求9所述的應用，其特征在于：所述的雙抗原夾心ELISA試劑盒用于鑒別CD2v缺失株免疫豬群中的豬是否存在非洲豬瘟病毒感染或用于未免疫豬群的非洲豬瘟病毒的抗體檢測。