[發(fā)明專利]一種快速定量水中大腸桿菌的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911293653.2
• 申請(qǐng)日: 2019-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN112980917A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔麗敏;趙偉高;趙鵬;孟玉杰;田一梅;褚獻(xiàn)獻(xiàn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/10
• 分類號(hào): C12Q1/10;C12Q1/06;G01N21/31
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 吳學(xué)穎

1.一種快速定量水中大腸桿菌的方法，其特征在于，將含大腸桿菌的待測(cè)樣品稀釋一定倍數(shù)后，采用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定待測(cè)樣品在特定波長(zhǎng)處的吸光度，根據(jù)建立的吸光度和大腸桿菌濃度之間的校正曲線或回歸方程，計(jì)算得到待測(cè)樣品中大腸桿菌的濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速定量水中大腸桿菌的方法，其特征在于，

(1)建立校正曲線或回歸方程

配制一組不同濃度的大腸桿菌菌懸液，通過紫外可見分光光度計(jì)分別在波長(zhǎng)220、260、280、300、350、400、450、500、550nm處測(cè)定其吸光度A，同時(shí)，用顯微計(jì)數(shù)法將對(duì)應(yīng)的每個(gè)濃度的菌懸液樣品進(jìn)行細(xì)胞精確計(jì)數(shù)，得到單位體積菌懸液中大腸桿菌濃度C；分別測(cè)定空白樣品在波長(zhǎng)220、260、280、300、350、400、450、500、550nm處的吸光度A_I，根據(jù)吸光度A-A_I和大腸桿菌濃度C繪制校正曲線，或線性回歸得到對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)處的回歸方程；

(2)計(jì)算大腸桿菌的濃度

稀釋含大腸桿菌的待測(cè)樣品，使稀釋后菌懸液中的大腸桿菌濃度在回歸方程或校正曲線的線性范圍內(nèi)，在與步驟(1)相同的條件下，采用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定220、260、280、300、350、400、450、500、550nm中任一波長(zhǎng)處稀釋后菌懸液的吸光度，根據(jù)對(duì)應(yīng)的校正曲線或回歸方程計(jì)算得到待測(cè)樣品中的大腸桿菌濃度。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速定量水中大腸桿菌的方法，其特征在于，步驟(1)中所述校正曲線或回歸方程的具體建立方法如下：

取一定量的大腸桿菌菌懸液，分別稀釋1、1.25、2、3、10、12.5、20、33、100、125、200、333、1000倍，空白組加入滅菌的背景溶液，將稀釋后不同濃度的菌懸液和空白組加入滅菌離心管中，每組3個(gè)平行樣；通過紫外可見分光光度計(jì)分別測(cè)定每個(gè)濃度的大腸桿菌菌懸液在220、260、280、300、350、400、450、500、550nm波長(zhǎng)處的吸光度，取平均值得到該濃度菌懸液的吸光度A，空白樣品的吸光度A_I；同時(shí)，用顯微計(jì)數(shù)法對(duì)各個(gè)濃度的菌懸液進(jìn)行細(xì)胞精確計(jì)數(shù)，每個(gè)樣品重復(fù)3次，取平均值得到大腸桿菌濃度C，在吸光度A-A_I和大腸桿菌濃度C之間建立校正曲線或回歸方程。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的快速定量水中大腸桿菌的方法，其特征在于，所述大腸桿菌菌懸液的制備按如下方法進(jìn)行：

(1)培養(yǎng)基的配置：

按照說明配置營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，并將培養(yǎng)基滅菌；

(2)大腸桿菌的培養(yǎng)：

將大腸桿菌工作菌種接種至滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，菌液接種量1％-2％，在37恒溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，時(shí)間約為16-24h，轉(zhuǎn)速150-170r/min；

(3)大腸桿菌菌懸液的制備：

在4℃條件下，以7000r/min離心10min，去除培養(yǎng)基，將大腸桿菌菌體沉淀振蕩重懸于生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液中，之后再次離心，再次重懸，總共洗滌3次，最后重懸于生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液中即制成大腸桿菌菌懸液。