[發明專利]一種快速定量水中大腸桿菌的方法

在審

• 申請號: 201911293653.2
• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN112980917A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 崔麗敏;趙偉高;趙鵬;孟玉杰;田一梅;褚獻獻
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12Q1/10
• 分類號: C12Q1/10;C12Q1/06;G01N21/31
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 吳學穎

本發明公開了一種快速定量水中大腸桿菌的方法，通過紫外可見分光光度計分別測定不同濃度大腸桿菌在波長220、260、280、300、350、400、450、500、550nm處的吸光度，同時用顯微計數法對大腸桿菌細胞進行精確計數，在吸光度和大腸桿菌濃度之間建立了良好的線性關系，根據所得到的校正曲線或回歸方程快速定量待測樣品中的大腸桿菌。本發明專利提供了一種快速定量水中大腸桿菌的方法，測量簡便，無需試劑，快速準確，可用于較高濃度、大批量樣品的測量。

技術領域

本發明涉及生物、醫學與環保領域，更具體的說，是涉及一種快速定量水中大腸桿菌的方法。

背景技術

大腸桿菌是水中的常見病原菌，會造成傳染性的腸道疾病，危害人們的身體健康。大腸桿菌是水質檢測中的重要指標：《城鎮污水處理廠污染物排放標準》(GB18918-2002)規定，污水處理廠出水中糞大腸桿菌要求低于10000個/L(一級A標)；《生活飲用水衛生標準》(GB5749-2006)規定，標準飲用水中總大腸桿菌群不得檢出。另外，作為一種代表性的革蘭氏陰性菌，大腸桿菌是科學研究中的典型微生物。因此，對水中大腸桿菌的快速定量檢測尤為重要。

水體中細菌微生物現有的定量方法主要包括顯微計數法、平板菌落計數法、發酵法、流式細胞儀計數法等。傳統的顯微計數法需要使用血球計數板或細菌計數板，檢測隨機性大、效率低、準確度不高；平板菌落計數法是最經典且常用的計數方法，但其耗時較長，在菌液濃度較大時需多次稀釋(培養基菌落最佳計數范圍為30-300個)，且只能對具有生長活性的細菌進行計數，誤差較大，不便于大量樣品的快速測定；發酵法需多次培養，步驟繁瑣；流式細胞儀計數法雖快速準確，但需建立合適的方法才能準確測定，且價格昂貴，不便于普遍使用。

現有的測試方法較為繁瑣，效率低，多適用于低濃度樣品。本專利提供一種快速定量水中大腸桿菌的方法，測量簡便，無需試劑，可用于較高濃度、大批量樣品的快速測量。

發明內容

針對現有技術中大腸桿菌快速定量監測方法不足的技術現狀，本發明提供一種更方便、簡單、有效的快速定量水中大腸桿菌的方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的。

本發明快速定量水中大腸桿菌的方法，將含大腸桿菌的待測樣品稀釋一定倍數后，采用紫外可見分光光度計測定待測樣品在特定波長處的吸光度，根據建立的吸光度和大腸桿菌濃度之間的校正曲線或回歸方程，計算得到待測樣品中大腸桿菌的濃度。

(1)建立校正曲線或回歸方程

配制一組不同濃度的大腸桿菌菌懸液，通過紫外可見分光光度計分別在波長220、260、280、300、350、400、450、500、550nm處測定其吸光度A，同時，用顯微計數法將對應的每個濃度的菌懸液樣品進行細胞精確計數，得到單位體積菌懸液中大腸桿菌濃度C；分別測定空白樣品在波長220、260、280、300、350、400、450、500、550nm處的吸光度A_I，根據吸光度A-A_I和大腸桿菌濃度C繪制校正曲線，或線性回歸得到對應波長處的回歸方程；

(2)計算大腸桿菌的濃度

稀釋含大腸桿菌的待測樣品，使稀釋后菌懸液中的大腸桿菌濃度在回歸方程或校正曲線的線性范圍內，在與步驟(1)相同的條件下，采用紫外可見分光光度計測定220、260、280、300、350、400、450、500、550nm中任一波長處稀釋后菌懸液的吸光度，根據對應的校正曲線或回歸方程計算得到待測樣品中的大腸桿菌濃度。

步驟(1)中所述校正曲線或回歸方程的具體建立方法如下：