[發明專利]雙功能融合多肽、細胞和藥物組合物及應用

有效

• 申請號: 201911291987.6
• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN111303296B
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 蔣俊;林鑫;謝樺函
• 申請（專利權）人: 啟辰生生物科技（珠海）有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N5/0783;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京北匯律師事務所 11711
• 代理人: 高元吉

1.雙功能融合多肽用于提高體外CD4T細胞和CD8T細胞亞群中IFN-γ陽性細胞的比例或TNF-α陽性細胞的比例的用途，其特征在于，所述雙功能融合多肽由第一功能肽、第二功能肽和所述第一功能肽與所述第二功能肽之間共價連接的連接子組成，所述連接子由依次連接的第一彈性區、回轉區和第二彈性區組成，且所述第一彈性區與所述第二彈性區分別含有可形成巰基的基團，所述第一彈性區和所述第二彈性區各自的序列如SEQ ID No. 5所示，所述回轉區的序列如SEQ ID No.6所示，所述第一功能肽為NKG2A的胞外區序列，其序列如SEQ ID No.1所示，且在其N端具有MGHTRRQGTSPSKCPYLNFFQLLVLAGLSHFCSG所示的序列，所述第二功能肽為CD94的胞外區序列，其序列如SEQ ID No.3所示。

2.一種用于增強DC細胞體外致敏T細胞的能力的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)用編碼GPC3抗原的mRNA和編碼雙功能融合多肽的mRNA轉染DC細胞得到負載有mRNA的DC細胞的步驟，具體地，轉染當天，用非酶類的細胞消化試劑把DC細胞消化成細胞懸液，離心后以PBS洗細胞兩次，以PBS重懸細胞，調整細胞密度在25-30×10⁶DCs/ml，按照每10⁶DC細胞轉染10μgmRNA的比例，混合DC細胞和融合多肽的mRNA，將細胞-mRNA混合物加入電轉杯，使用電轉儀，將抗原mRNA轉染到DC細胞中，電轉后的細胞，用無細胞因子的1640培養基重懸，調整細胞密度到2×10⁵DCs/ml，放入37℃，5％CO₂細胞培養箱中繼續培養6小時；其中：

所述雙功能融合多肽由第一功能肽、第二功能肽和所述第一功能肽與所述第二功能肽之間共價連接的連接子組成，所述連接子由依次連接的第一彈性區、回轉區和第二彈性區組成，且所述第一彈性區與所述第二彈性區分別含有可形成巰基的基團，所述第一彈性區和所述第二彈性區各自的序列如SEQ ID No. 5所示，所述回轉區的序列如SEQ ID No.6所示，所述第一功能肽為NKG2A的胞外區序列，其序列如SEQ ID No.1所示，且在其N端具有MGHTRRQGTSPSKCPYLNFFQLLVLAGLSHFCSG所示的序列，所述第二功能肽為CD94的胞外區序列，其序列如SEQ ID No.3所示；

(2)將復蘇過夜的外周血單核細胞PBMC以2×10⁶/ml的濃度接種到96孔板中，每個孔接種100μl細胞，進行T淋巴細胞的激活，向孔中加入負載有mRNA的DC細胞至PBMC:DC=10:1，將細胞于37℃培養10-12天。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，編碼雙功能融合多肽的mRNA對應的基因序列如SEQ ID No.9所示。