[發(fā)明專利]一種利用細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核分子標(biāo)記創(chuàng)制香菇栽培菌株核質(zhì)雜交種的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911290279.0
• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN110904262B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋曉霞;陳明杰;趙妍;宋春艷;譚琦;章爐軍
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6869;C12Q1/04;C12N15/04;A01H15/00;C12R1/645
• 代理公司: 蘇州翔遠(yuǎn)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32251
• 代理人: 王華

一種利用細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核分子標(biāo)記創(chuàng)制香菇栽培菌株核質(zhì)雜交種的方法，包括下列步驟：步驟1：確定第一種香菇的細(xì)胞質(zhì)類型，使用的rrnL部分基因上游引物為Seq No.1，rrnL部分基因下游引物為Seq No.2；步驟2：確定第二種香菇的細(xì)胞核類型，使用的上游引物為Seq No.3，下游引物為Seq No.4；步驟3：以測定的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核序列作為分子標(biāo)記，采用原生質(zhì)體制備單倍體、單單雜交和回交等技術(shù)創(chuàng)制栽培菌株的核質(zhì)雜交種。本發(fā)明為香菇新品種的培育提供有益幫助。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食用菌分子鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鑒定香菇菌株細(xì)胞核類型的方法、一種鑒定香菇菌株細(xì)胞質(zhì)類型的方法和一種創(chuàng)制香菇栽培菌株核質(zhì)雜交種的方法。

背景技術(shù)

菌種是香菇生產(chǎn)三大要素(菌種、培養(yǎng)料和栽培管理)中最重要的基礎(chǔ)生產(chǎn)資料，是影響香菇產(chǎn)量及質(zhì)量構(gòu)成的關(guān)鍵因子。我國擁有豐富的野生種質(zhì)資源，引以為傲的砍花法階段所用的菌種也是各地的野生菌種，但在引進(jìn)純菌種技術(shù)和日本菌種之后，日本菌種一直作為我國香菇新菌種培育親本的主要來源，甚至我國栽培菌種與廣布野生種已屬于不同的類群。 2003年，日本專門修改《種苗法》，對中國香菇凡帶有日本原菌種DNA特征的，賦予海關(guān)查驗(yàn)后按侵犯知識產(chǎn)權(quán)處理。假如現(xiàn)在我國栽培菌種都屬于日本菌種的后裔，那將來在全球香菇貿(mào)易中，我國香菇產(chǎn)業(yè)受到的影響很難想象。當(dāng)務(wù)之急是首先明晰中國香菇栽培菌種的來源，如果與假設(shè)一樣，就需尋找一個新的突破口對我國的香菇種質(zhì)資源進(jìn)行改良和創(chuàng)新。

香菇同日本的Shiitake一樣都是俗稱，它的學(xué)名為Lentinula edodes(Berk.)Pegler，主要分布在東亞。但隨著交配反應(yīng)和分子數(shù)據(jù)的引入，L.edodes的分類情況越來越復(fù)雜，其中最受大家認(rèn)可的是Hibbett基于ITS(Internal transcribed spacer)數(shù)據(jù)得出的結(jié)論：香菇是個復(fù)合種，學(xué)名為L.edodes sensu lato。它包括四個形態(tài)種：分布于東亞的狹義香菇L.edodes sensu stricto，分布于東南亞的磚紅香菇L.lateritia，分布于新西蘭的新西蘭香菇L.novaezelandiae 和分布在東亞西南部高海拔地區(qū)的一個未被描述的形態(tài)種。其中，狹義香菇和磚紅香菇各包括兩個分支，狹義香菇的一個分支分布在東亞的北部，一個分支分布在東亞的南部。從地理分布來看，中國香菇具有狹義香菇的兩個分支和未被描述的形態(tài)種，日本僅有分布在東亞北部的狹義香菇一個分支。

為了方便，狹義香菇標(biāo)為A類群(東亞北部的分支為A1，東亞南部的分支為A2)，未被描述的形態(tài)種標(biāo)為B類群。我們團(tuán)隊(duì)在前期工作中利用ITS1/5.8S/ITS2多態(tài)性和線粒體基因組分別對中國香菇野生和栽培種細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行了分型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)中國栽培和野生香菇菌種的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均存在A1型，在野生種中還存在A2和B型。追溯我國砍花法時期的栽培區(qū)域，這個區(qū)域多屬于A2型分布區(qū)域，少為B型分布區(qū)域，而現(xiàn)在所用的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)都為A1型的栽培菌種與我國東北部、日本的野生種分布區(qū)域一致。考慮到我國栽培菌種的親本來源，很難排除我國現(xiàn)在栽培菌種都是日本菌種的后裔。甚至許多由細(xì)胞核A2 或B型分布區(qū)的野生種與日本優(yōu)良菌株雜交而來的栽培種中也沒有細(xì)胞核A2和B型遺傳物質(zhì)的影子。看來擔(dān)心的結(jié)果還是呈現(xiàn)了，我國現(xiàn)有栽培菌種的細(xì)胞核均為日本菌種的后裔，廣布野生型細(xì)胞核并沒有轉(zhuǎn)移到栽培種中。