[發(fā)明專利]一種檢測法舒地爾中異喹啉磺酸酯類基因毒性雜質(zhì)的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201911289969.4
• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN112986409A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊鵬輝;肖云華;袁和亮
• 申請（專利權(quán)）人: 南京億華藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
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本發(fā)明公開了一種檢測鹽酸法舒地爾中異喹啉磺酸酯類基因毒性雜質(zhì)的LC?MS/MS方法。所述方法的特征是采用反相C18柱作為固定相，流動相由A相和B相組成，流動相均由有機溶劑和緩沖鹽的混合物配制而成，在液相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用儀系統(tǒng)中進(jìn)行梯度洗脫。本發(fā)明提供的方法具有高效便捷、專屬性好、靈敏度高等優(yōu)點，可對鹽酸法舒地爾中異喹啉磺酸酯類基因毒性雜質(zhì)殘留進(jìn)行快速準(zhǔn)確的定性和定量分析，從而保證了鹽酸法舒地爾的質(zhì)量、提高臨床用藥的安全性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域，具體涉及一種檢測鹽酸法舒地爾中異喹啉磺酸酯類基因毒性雜質(zhì)的LC-MS/MS方法。

背景技術(shù)

鹽酸法舒地爾（Fasudil Hydrochloride），即六氫-1-(5-異喹啉磺酰基)-1H-1,4-二氮雜?鹽酸鹽，其分子式為C₁₄H₁₇N₃O₂S·HCL，分子量為327.83，其結(jié)構(gòu)式：

鹽酸法舒地爾是日本Asahi Kasei株式會社于上世界80年代開發(fā)的異喹啉磺胺類藥物，是一種蛋白激酶RHO抑制物（細(xì)胞內(nèi)鈣離子拮抗劑），通過阻斷血管收縮過程的最后階段，也即通過增加肌球蛋白輕鏈磷酸酶的活性，擴張血管（抑制血管痙攣），降低內(nèi)皮細(xì)胞的張力發(fā)揮藥效，從而改善腦組織微循環(huán)，不產(chǎn)生和加重腦的盜血。其臨床上主要用于改善和預(yù)防蛛網(wǎng)膜下腔出血后的腦痙攣及引起的腦缺血癥狀，同時還可以保護神經(jīng)抗凋亡，促進(jìn)神經(jīng)再生。

鹽酸法舒地爾（WFH）作為高效的血管擴張藥物，可以有效緩解腦血管痙攣，是一種具有廣泛藥理作用的新型藥。

鹽酸法舒地爾的合成技術(shù)路線如下：

異喹啉-5-磺酸 [氯代] 異喹啉-5-磺酰氯鹽酸鹽 [堿中和] 異喹啉-5-磺酰氯

異喹啉-5-磺酰氯 高哌嗪 法舒地爾 [成鹽] 鹽酸法舒地爾

中間體異喹啉-5-磺酰氯活性較大，殘留到后續(xù)反應(yīng)中可能與后處理過程中所用的溶劑甲醇，乙醇發(fā)生酯化反應(yīng)，分別生成異喹啉-5-磺酸甲酯，異喹啉-5-磺酸乙酯（如下式所示），有可能殘留到鹽酸法舒地爾成品中，故需要對鹽酸法舒地爾中的異喹啉-5-磺酸甲酯，異喹啉-5-磺酸乙酯進(jìn)行檢測。

異喹啉-5-磺酰氯 異喹啉-5-磺酸甲酯

異喹啉-5-磺酰氯 異喹啉-5-磺酸乙酯

由于基因毒性雜質(zhì)的含量限度要求低，異喹啉-5-磺酸甲酯，異喹啉-5-磺酸乙酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)中包含異喹啉環(huán)，ESI離子源離子化效率較高，故在質(zhì)譜檢測器上有較好的響應(yīng)。

鹽酸法舒地爾注射液藥典規(guī)定成人一日2—3次，每次30mg，以適量的電解質(zhì)液稀釋后靜脈點滴，每次需30分鐘。本品給藥應(yīng)在蛛網(wǎng)膜下腔出血術(shù)后早期開始，連用2周。參考服用劑量，每天最多可能的暴露量為90mg。

歐洲藥物管理局發(fā)布了關(guān)于基因毒性雜質(zhì)（GTI）的最大攝取量為1.5 μg/d，異喹啉-5-磺酸甲酯和異喹啉-5-磺酸乙酯TTC值按1.5 μg/d計算，異喹啉-5-磺酸甲酯和異喹啉-5-磺酸乙酯基因毒性雜質(zhì)的總含量不得超過16.6ppm。

所以，本試驗研究選擇高靈敏度的液相色譜色譜分離-質(zhì)譜檢測的技術(shù)對鹽酸法舒地爾中異喹啉-5-磺酸甲酯，異喹啉-5-磺酸乙酯進(jìn)行直接限度檢查，可以更好的控制鹽酸法舒地爾原料藥的質(zhì)量，更好地對鹽酸法舒地爾原料藥中可能存在的異喹啉磺酸酯類基因毒性雜質(zhì)進(jìn)行檢測。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是建立一個鹽酸法舒地爾中異喹啉磺酸酯類基因毒性雜質(zhì)殘留檢測的LC-MS/MS方法，該方法為鹽酸法舒地爾的潛在基因毒性雜質(zhì)異喹啉磺酸酯類含量的測定提供了一種準(zhǔn)確的、高效的檢測方法。