[發明專利]一種保健食品中利格列汀和沙格列汀同時檢測的方法

在審

• 申請號: 201911289056.2
• 申請日: 2019-12-13
• 公開（公告）號: CN111189949A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 邊海濤;張雨萌;李海燕;李鵬;毛希琴;姜俊;勇艷華;李莉;付麗莎
• 申請（專利權）人: 大連市檢驗檢測認證技術服務中心
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 大連理工大學專利中心 21200
• 代理人: 李曉亮;溫福雪

1.一種保健食品中利格列汀和沙格列汀同時測定的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)配制0.1％甲酸水溶液、0.1％甲酸乙腈溶液；

(2)標準溶液的配制

①標準儲備液：準確稱取沙格列汀、利格列汀標準品，分別用甲醇溶解后，制成濃度均為1mg/mL標準儲備液，-18℃保存；

②混合標準中間液：將沙格列汀、利格列汀標準儲備液置于容量瓶中，加入甲醇制成混合標準中間液，其中利格列汀濃度為10μg/mL，沙格列汀濃度為1μg/mL；

③基質匹配混合標準工作溶液：分別將定量混合標準中間液于五個容量瓶中，加入空白樣品溶液稀釋，作為系列基質匹配標準工作溶，沙格列汀濃度依次為2ng/mL、4ng/mL、8ng/mL、10ng/mL、50ng/mL；利格列汀濃度依次為20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、100ng/mL、500ng/mL；所述空白樣品溶液指不含沙格列汀和利格列汀的樣品經前處理后得到的樣品溶液；

(3)樣品的前處理方法，制備樣品溶液

將樣品置于具塞離心管中，加入甲醇渦旋混勻后超聲提取，離心處理，將上清液用0.22μm濾膜過濾；取濾液，并根據實際濃度適當稀釋至線性范圍內，供液相色譜-串聯質譜儀分析；

(4)液相色譜-串聯質譜分析參考條件

①色譜參考條件

a)色譜柱：Agilent Agilent SB-Aq；

b)流動相：A：0.1％甲酸水溶液，B：0.1％甲酸乙腈溶液，梯度洗脫；

c)流速：0.2mL/min；

d)柱溫：25℃；

e)進樣量：1μL；

梯度洗脫程序見表1；

表1梯度洗脫程序

時間/min	流動相A/％	流動相B/％
0	98	2
6.5	40	60
6.6	10	90
7.6	10	90
7.7	98	2
10	98	2

②質譜參考條件

a)離子源：電噴霧離子源(ESI)；

b)檢測方式：多反應監測(MRM)；

c)掃描方式：正離子模式；

d)毛細管電壓：4000V；

e)離子源溫度：300℃；

f)干燥氣流量：15L/min；

g)霧化氣壓力：35psi；

h)鞘氣溫度：350℃；鞘氣N₂流量：11L/min；

i)其他質譜參數見表2；

表2化合物定性、定量離子和質譜分析參數

^*定量離子對；

(5)定性分析

按照高效液相色譜-串聯質譜條件測定樣品和基質匹配標準工作溶液，記錄樣品和標準溶液中各化合物的色譜保留時間，以相對于最強離子豐度的百分比作為定性離子對的相對豐度，記錄濃度相當的樣品與基質匹配標準工作溶液中相應成分的相對離子豐度；當樣品中檢出與2種化合物中某標準品色譜峰保留時間一致的色譜峰，即變化范圍在±2.5％之內，并且相對離子豐度允許偏差不超過表3規定的范圍，可以確定樣品中檢出相應化合物；

表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

相對豐度(％)	最大允許偏差(％)
k50％	±20
50％≥k20％	±25
20％≥k10％	±30
k≤10％	±50

(6)定量測定

將基質匹配混合標準工作溶液分別按儀器參考條件進行測定，得到相應的標準溶液的色譜峰面積；以基質匹配混合標準工作溶液的濃度為橫坐標，以色譜峰的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線；

樣品溶液中目標物的含量，用標準曲線外標法確定；

樣品中目標物的含量按公式進行計算；式中：X為樣品中各目標物的含量，mg/kg；C為從標準曲線中讀出的樣品溶液中各目標物的濃度，ng/mL；V為樣品溶液最終定容體積，mL；m為樣品溶液所代表的質量，g；K為稀釋倍數。

2.根據權利要求1所述的一種保健食品中利格列汀和沙格列汀同時測定的方法，其特征在于，所述的步驟(3)中，超聲提時間為30min；離心轉速為12000r/min，離心時間為3min。