[發明專利]基于核酸適配體的高敏C反應蛋白納米免疫層析檢測方法

有效

• 申請號: 201911283287.2
• 申請日: 2019-12-13
• 公開（公告）號: CN111044729B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 廉婷;任曼;陳程;姚楊;邱忠營;李慧瑾;張旭東
• 申請（專利權）人: 西安醫學院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/558
• 代理公司: 西安弘理專利事務所 61214
• 代理人: 曾慶喜

1.基于核酸適配體的高敏C反應蛋白納米免疫層析檢測方法，其特征在于，具體按照下述步驟進行：

步驟1、根據是否與hsCRP結合選擇一對核酸適配體：基于C反應蛋白的核酸適配體A和基于C反應蛋白的核酸適配體B；

步驟2、將步驟1得到的核酸適配體A進行標記，將標記的核酸適配體A與修飾后的金納米微粒偶聯，得到AuNPs-Aptamer復合物；

步驟3、將步驟1得到的核酸適配體B進行標記，將標記的核酸適配體B與鏈霉親和素復合，得到核酸適配體B與鏈霉親和素的復合物；

步驟4、將步驟2得到AuNPs-Aptamer復合物和步驟3得到的復合物噴涂到免疫層析試紙條上進行檢測；

所述核酸適配體A的基因序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述核酸適配體B的基因序列如SEQID?NO.2所示。

2.根據權利要求1所述的基于核酸適配體的高敏C反應蛋白納米免疫層析檢測方法，其特征在于，所述核酸適配體A的DNA序列的5’端被-SH巰基標記，3’端被生物素Biotin標記。

3.根據權利要求1所述的基于核酸適配體的高敏C反應蛋白納米免疫層析檢測方法，其特征在于，所述核酸適配體B的DNA序列的3’端被生物素Biotin標記。

4.根據權利要求1所述的基于核酸適配體的高敏C反應蛋白納米免疫層析檢測方法，其特征在于，所述步驟3中免疫層析試紙條包括底板(1)，所述底板(1)表面上呈線性依次固接有上樣墊(2)，結合墊(3)、硝酸纖維素膜(4)和吸收墊(5)，所述上樣墊(2)與結合墊(3)部分貼合，所述結合墊(3)與硝酸纖維素膜(4)部分貼合，硝酸纖維素膜(4)和吸收墊(5)部分貼合，所述硝酸纖維素膜(4)上嵌有檢測線T(6)，硝酸纖維素膜(4)靠近吸收墊(5)的一側設有質控線C(7)。

5.根據權利要求4所述的基于核酸適配體的高敏C反應蛋白納米免疫層析檢測方法，其特征在于，所述步驟3中具體按照下述方法進行：

步驟3.1，將步驟2得到AuNPs-Aptamer復合物滴加至上樣墊(2)、將步驟3得到的核酸適配體B與鏈霉親和素的復合物涂在檢測線T(6)，同時在質控線C(7)上涂有鏈霉親和素；

步驟3.2，觀察所述免疫層析試紙條線質控線C(7)是否發生顯色反應；

若質控線C(7)不顯色，說明檢測無效；

若質控線C(7)顯色，則說明檢測結果可信。

6.根據權利要求5所述基于核酸適配體的高敏C反應蛋白納米免疫層析檢測方法，其特征在于，所述步驟3.1中試紙條質控線C(7)上鏈霉親和素在復合物中的濃度為1～2.5mg/mL。

7.根據權利要求6所述基于核酸適配體的高敏C反應蛋白納米免疫層析檢測方法，其特征在于，所述質控線C(7)上鏈霉親和素在復合物中的濃度為2mg/mL。