[發明專利]一種具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白及其制備方法有效
| 申請號： | 201911282247.6 | 申請日： | 2019-12-13 |
| 公開（公告）號： | CN110894224B | 公開（公告）日： | 2022-06-24 |
| 發明（設計）人： | 杜明;李晗;王震宇;譚曉怡;吳超;夏小雨;喬昕昱 | 申請（專利權）人： | 大連工業大學 |
| 主分類號： | C07K14/435 | 分類號： | C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18;C12R1/19 |
| 代理公司： | 大連格智知識產權代理有限公司 21238 | 代理人： | 劉琦 |
| 地址： | 116034 遼寧省大*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 具有 高熱 穩定性 牡蠣 鐵蛋白 及其 制備 方法 | ||
1.一種具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根據權利要求1所述具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白，其特征在于，所述具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白絕對量為1mg時，變性溫度為87℃。
3.根據權利要求1所述具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白，其特征在于，所述具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白的活性為0.4370iron/subunit/s。
4.一種編碼如權利要求1所述具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白的基因mGF1，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
5.一種具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白的制備方法，其特征在于，包括步驟：
S1、獲得編碼如權利要求1所述具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白的核苷酸序列，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
S2、將所述核苷酸序列插入pET載體中，獲得重組質粒；
S3、將所述重組質粒轉化大腸桿菌BL21，進行表達培養；
S4、提取所述大腸桿菌BL21表達的具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白。
6.根據權利要求5所述具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白的制備方法，其特征在于，步驟S3所述表達培養的條件為：在含有重組質粒的大腸桿菌BL21的培養基中加入終濃度為0.6mM的異丙基硫代半乳糖苷，28℃搖菌培養6h。
7.根據權利要求5所述具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白的制備方法，其特征在于，步驟S4所述具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白的提取過程為：超聲破碎含有重組質粒的大腸桿菌BL21，離心取上清液，將所述上清液依次經過硫酸銨沉淀、透析除鹽、弱陰離子交換層析，得所述具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白。
8.根據權利要求7所述具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白的制備方法，其特征在于，所述弱陰離子交換層析為DEAE纖維素柱層析。
9.根據權利要求7所述具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白的制備方法，其特征在于，所述離心的轉速為10000rpm。
10.根據權利要求7所述具有高熱穩定性的牡蠣鐵蛋白的制備方法，其特征在于，所述硫酸銨沉淀，4℃、硫酸銨的飽和度為80％。
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