[發明專利]超聲波輔助酶法提取的百尾參多糖、其方法及應用

有效

• 申請號: 201911281242.1
• 申請日: 2019-12-13
• 公開（公告）號: CN110950972B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 甘秀海;宋寶安;胡德禹;吳劍;張建;陳吉祥
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A01N65/42;A01N43/16;A01P1/00;A61K31/715;A61K36/896;A61P35/00
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務有限公司 52002
• 代理人: 袁慶云

本發明公開了一種超聲波輔助酶法提取的百尾參多糖、其方法及應用，是按質量份數取1份過60目篩后的百尾參粉末浸泡于15~50份的蒸餾水中并調pH值至3.5~7.0，于30~70℃下保溫靜置15~30 min；然后加入百尾參干粉質量0.1~10%的酶，于30~70℃下酶解0.5~3 h，得混合物；30~70℃下超聲提取10~60 min；80~90℃下滅酶處理5~20 min；室溫冷卻，于3000~6000 rpm離心10~30 min，取上清液用旋轉蒸發儀濃縮至1/2~1/5體積，然后加入4~5倍濃縮液體積的無水乙醇，于4℃下靜置2~8h，5000~6000 rpm離心10~20 min，再經無水乙醇洗滌，冷凍干燥得到。本發明對腫瘤細胞具有毒性，對煙草花葉病毒和黃瓜花葉病毒較好的抑制活性，提取率高，提取時間短，節約能源，環保。

技術領域

本發明涉及中藥技術領域，具體來說涉及超聲波輔助酶法提取的百尾參多糖，同時還涉及該超聲波輔助酶法提取的百尾參多糖的方法，及該超聲波輔助酶法提取的百尾參多糖對腫瘤細胞毒性和抗病毒領域的應用。

背景技術

多糖是由10個以上的單糖通過糖苷鍵連接形成的天然高分子聚合物，廣泛存在于植物、動物及微生物中。它既是細胞的組成物質，又是調節各種生命活動的重要物質。研究發現植物多糖具有多種生理功能，如抗氧化、抗疲勞、抗腫瘤、抗凝血、降血糖、降血脂及調節免疫功能，并且對人體的毒副作用相對較小。多糖在醫學領域的研究與應用越來越受到國內外專家學者的青睞，目前應用于臨床的有香菇多糖、豬苓多糖、靈芝多糖、云芝多糖、黃芪多糖等。相關文獻報道多糖還具有較好的抗植物病毒活性，如香菇多糖及其組合物具有較好的抗煙草花葉病毒和黃瓜花葉病毒的活性，且具有誘導作物產生抗病力，抑制病毒侵染的作用，進而增加產量和提高品質的作用。因此，多糖已成為當前醫藥及農藥研究的熱點領域之一。

百尾參為百合科萬壽竹屬植物萬壽竹(Disporum cantoniense(Lour.)Merr.)的根及根莖，為多年生草本植物，為苗族習用藥材，是咳速停系列藥物的主藥，其味甘、淡，性平，具有潤肺止咳、健脾消積的功效，用于虛損咳喘、痰中帶血等癥狀。有關百尾參的研究主要集中在栽培方面，對其化學成分研究較少，主要含有甾體、酰胺及黃酮等成分；研究報道百尾參及其化學成分具有抗菌、抗氧化、抗炎鎮痛及袪痰止咳等藥理作用。

目前關于多糖提取工藝的研究極少，目前已公開的中國專利公開號CN104844720A，公開了“一種百尾參多糖的分離提取方法”，該方法是將干燥粉粹后的百尾參先用石油醚脫脂3h，再于高溫下提取數次，每次數小時，最后用樹脂脫色、Sevag試劑脫蛋白得到百尾參多糖；所得多糖具有較強的袪痰止咳及抗氧化活性。上述方法為百尾參多糖的開發提供了科學依據和實驗基礎，但是在工藝推廣及工業化生產上仍存在以下不足：①傳統水提法得率較低，且提取時間較長，能耗大，提取成本較高；②提取及純化過程中使用大量的有機溶劑，帶來了環境污染。

相對于傳統水提法，使用酶處理超聲輔助可在比較溫和的條件下分解植物組織，破粹細胞，加速多糖的溶出，能快速提高得率。中國專利公開號CN101580553B，公開了一種酶法輔助提取蒺藜多糖的方法，該方法使用纖維素酶、木聚糖酶及果膠酶輔助提取蒺藜多糖，可使得率提高18-40.67％，純度提高15-42％。中國專利公開號CN103319617A，公開了一種利用超聲波協同酶法提取紫薯多糖的方法及應用，該方法利用超聲波協同淀粉酶輔助提取紫薯多糖，可明顯提高多糖的得率。中國專利公開號CN103145863A，公開了一種酶處理提取鎖陽多糖的方法及鎖陽多糖抗腫瘤制劑的制備，相對于傳統方法，該方法可使多糖得率提高10-65％，多糖含量提高5-40％。中國專利公開號CN 104004108A，公開了一種酶解制備鎖陽多糖的方法，該方法利用胃蛋白酶輔助提取鎖陽多糖，可使多糖的得率提高95-273％。但尚未見到酶處理、超聲處理或酶解超聲輔助提取百尾參多糖對腫瘤細胞毒性、抗植物病毒活性的報道。

發明內容

本發明的目的在于克服上述缺點而提供的一種對腫瘤細胞具有毒性，對煙草花葉病毒和黃瓜花葉病毒具有較好的抑制活性，得率高，提取時間短，節約能源，環保的超聲波輔助酶法提取的百尾參多糖。