[發明專利]木芙蓉內源細胞分裂素提取劑及其使用方法

有效

• 申請號: 201911279805.3
• 申請日: 2019-12-13
• 公開（公告）號: CN110988172B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 劉曉莉;夏中梅;王強鋒;林楊;胡鳳科;徐遠超;馬嬌;劉興鳳;朱章順;侯勇
• 申請（專利權）人: 成都市植物園;四川省農業科學院生物技術核技術研究所;四川省蘭月科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/72
• 代理公司: 成都立新致創知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51277
• 代理人: 譚德兵

本發明屬于內源激素提取技術領域，具體涉及一種木芙蓉內源細胞分裂素提取劑及其使用方法。本發明木芙蓉內源細胞分裂素提取劑，是由A劑和B劑按照質量比1～2:1的比例混合后制備而成；所述A劑是由甘氨酸、鄰苯二甲酸、磷酸氫二鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、氫氧化鈉、乙酸、乙酸鈉、鹽酸中的至少2種，用重蒸水溶解后配制成pH在2～3的混合水溶液；所述B劑為甲醇。本發明木芙蓉內源細胞分裂素提取方法簡單，成本低，對木芙蓉內源細胞分裂素的提取率高達86～95%，符合行業普遍認可的檢測方法要求，本發明技術方案簡單可行，更加適宜推廣。

技術領域

本發明屬于內源激素提取技術領域，具體涉及一種木芙蓉木芙蓉內源細胞分裂素提取劑及其使用方法。

背景技術

植物激素是指植物在正常發育過程中或特殊環境條件下，代謝產生或生物合成的天然有機化合物，以極微量的濃度產生明顯的生理反應，在植物的組織器官分化、形態建成、生長發育、衰老等多種生理過程中起著重要的調節作用，也影響農作物產量、品質和抗性等重要性狀。目前公認的六大類植物內源激素有植物生長素類(auxins)、赤霉素類(gibberenllins，GA)、細胞分裂素類(cytokinins，CK)、乙烯(ethylene)、脫落酸(abscisicacid，ABA)、油菜素甾醇類(Brassinosteroids，BRs)。

木芙蓉(Hibiscus?mutabilis?Linn.)又名芙蓉花、拒霜花、木蓮、地芙蓉、華木，原產中國。其喜溫暖、濕潤環境，不耐寒，忌干旱，耐水濕。對土壤要求不高，瘠薄土地亦可生長。為錦葵科、木槿屬落葉灌木或小喬木。花于枝端葉腋間單生。花、葉均可入藥，有清熱解毒，消腫排膿，涼血止血之效。木芙蓉內源細胞分裂素是植物體內合成的一系列痕量小分子化合物，在極低的濃度下就能發揮多種生理作用。木芙蓉內源細胞分裂素在植物體內含量極低、性質不穩定，其定量檢測一直是當前研究的熱點和難點。

公開號為CN103884810A，發明名稱為“一種高效分離和測定草坪草內源細胞分裂素的方法”，采用的是取0.5g鮮樣，用液氮研磨，然后加提取液5ml，-20℃提取過夜，得浸提液；所述的提取液即甲醇：甲酸：水＝15：1：4，按v/v，再加40mg/ml2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚作為抗氧化劑。公開號為CN103048404A，發明名稱為“一種植物樣品中內源性細胞分裂素的定量檢測方法”，采用的是乙腈為提取劑。公開號為CN109991339A，名稱為“一種測定微量植物樣品中內源激素的樣品預處理方法”，采用的是破壁酶為提取劑。

可見，對于植物內源激素的分析，首先選用合適的提取劑劑實現無損完全提取目標物，既要避免許多干擾物質，又要防止破壞內源激素本身，其次采用各種萃取或層析步驟，使內源激素得到部分提純，然后再測定其含量。但是目前現有技術在提取內源激素時，普遍存在有機溶劑使用量大，提取方法復雜，成本高且提取率低，難以避免酚類、色素及蛋白質、脂類，核酸等非目標化合物對實驗結果的干擾等問題。而且目前還未查見有直接針對木芙蓉組織/器官內源細胞分裂素提取的技術方案、檢測方法及檢測結果的論文、專利、科研成果等公開的文獻報道。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明根據木芙蓉內源激素的特點，提出了一種有利于簡化浸提液的純化步驟，避免過多色素及雜質對檢測結果的干擾的木芙蓉內源細胞分裂素提取提取劑及其使用方法。

本發明提供一種木芙蓉內源細胞分裂素提取劑，是由A劑和B劑按照質量比1～2:1的比例混合后制備而成；

所述A劑是由甘氨酸、鄰苯二甲酸、磷酸氫二鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、氫氧化鈉、乙酸、乙酸鈉、鹽酸中的至少2種，用重蒸水溶解后配制成pH在2～3的混合水溶液；其中A劑原料組份比例關系因摩爾質量與理化特性差異進行適宜的調整，滿足混合試劑pH在2-3之間即為本發明技術方案所述A劑，保持提取液為酸性介質環境，可以鈍化植物組織中磷酸酶等酶的活性，以阻止磷酸酶等對細胞分裂素核苷酸水解過程，避免因酶解作用導致相應的核苷回收率升高從而影響檢測結果；

所述B劑為甲醇。