[發明專利]一種利用魷魚眼制備小分子透明質酸的方法

在審

• 申請號: 201911277978.1
• 申請日: 2019-12-13
• 公開（公告）號: CN110863024A
• 公開（公告）日: 2020-03-06
• 發明（設計）人: 吳文惠;楊勁峰
• 申請（專利權）人: 山東人和集團有限公司
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C08B37/08
• 代理公司: 濟南日新專利代理事務所 37224
• 代理人: 李科偉

本發明公開了一種利用魷魚眼制備小分子透明質酸的方法，其解決現有透明質酸制備工藝繁瑣、成本較高、產品純度低的問題。包括以下步驟：1）原料預處理；2）透明質酸提取；3）除雜；4）透明質酸小分子化；5）透析、干燥。本發明利用丙酮處理魷魚眼使其變性，通過浮選技術提取透明質酸，再經超臨界二氧化碳流體和酶解脫除脂肪和蛋白等雜質，再使用透明質酸酶對透明質酸進行剪切，最后通過透析制備小分子量介于1000?40000Da的透明質酸。本發明操作工藝簡單，成本低，安全性高，且產品純度高，分子結構穩定，產品的生物活性高，具有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明涉及透明質酸的制備，尤其是一種利用魷魚眼制備小分子透明質酸的方法。

背景技術

透明質酸(HA)又名玻尿酸，是一種不含硫的天然大型多糖類，由雙糖單位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺組成的一種陰離子酸性粘多糖。因其超強的持水性、黏彈性和滲透性以及生物學功能，被廣泛應用于保健品、化妝品和醫藥領域。

近年來，隨著透明質酸研究的深入，小分子透明質酸因其良好的生物滲透、吸收的特性， 小分子透明質酸制備研究成為國內外研究熱點。目前，小分子透明質酸制備的方法主要有物理、化學、生物降解法。然而，物理方法制備的產物分子量難以按照需要生產；化學降解方法需要較劇烈的反應條件（如強酸、堿等），才能達到高的降解程度，導致功能鍵斷裂，有效結構被破壞，顯著影響小分子透明質酸的質量和生物活性。酶解法是反應溫和，是降解透明質酸的有效方法，但現有酶解方法均針對成品透明質酸進行降解，工藝較為繁瑣，制備成本較高，并且現有技術仍無好的方法制備不同特定分子量的透明質酸。

魷魚是我國重要的水產加工原料，產生30%的加工副產物，缺乏有效的利用途徑，通常用于加工魚粉的原料。加工下腳料中魷魚眼約占5％，魷魚眼含玻璃體，可以用作小分子HA提取的資源。

發明內容

為了克服現有透明質酸制備工藝繁瑣、成本較高、產品純度低的不足，本發明的目的在于提供一種利用魷魚眼制備小分子透明質酸的方法。該制備方法利用丙酮使魷魚眼變性，再通過浮選技術提取透明質酸，經超臨界二氧化碳流體和酶解脫除脂肪和蛋白等雜質，使用透明質酸酶對透明質酸進行剪切，最后通過透析制備小分子量的透明質酸，制得的小分子透明質酸分子量介于1000－40000Da。本發明方法的操作工藝簡單，制備成本低，安全性高，產品純度高，分子結構穩定，生物活性高。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種利用魷魚眼制備小分子透明質酸的方法，其特征在于：其經過以下步驟：

（1）原料預處理：將新鮮魷魚眼粉碎，加入其2-5倍重量的丙酮，靜置10-15min，離心除去丙酮，得到魷魚眼原料；

（2）透明質酸提取：稱取步驟（1）中得到的魷魚眼原料，加入其5-10倍重量、質量分數為1-15%的月桂醇聚醚硫酸酯銨水溶液，不斷攪拌，收集產生的氣泡，在收集的氣泡中加入氣泡重量2-5倍的、質量濃度95%的乙醇，同時用酸溶液調節pH值為5-6，充分攪拌，離心收集沉淀，并用丙酮反復沖洗，得粗透明質酸；

（3）除雜：將步驟（2）中得到的粗透明質酸用超臨界二氧化碳處理；選取處理后剩余物料，加入等質量的蒸餾水，同時加入蒸餾水重量2-6%的蛋白酶，酶解并在結束后滅活，離心，取上清液；

（4）透明質酸小分子化：將步驟（3）中得到的上清液中加入質量分數為3-5%的透明質酸酶，攪拌，酶解條件為：pH值6-8，酶解溫度30-40℃，酶解時間30-90min，酶解結束后離心，取上清液；

（5）透析、干燥：將步驟（4）中得到的上清液轉移至透析袋中，經過兩步透析，在室溫下共透析20-24h，取第二步透析的去離子水，加入其1-3倍體積的、質量濃度95%的乙醇，靜置，離心，取沉淀，冷凍干燥，即得透明質酸。