[發明專利]一種利用魷魚眼制備小分子透明質酸的方法

在審

• 申請號: 201911277978.1
• 申請日: 2019-12-13
• 公開（公告）號: CN110863024A
• 公開（公告）日: 2020-03-06
• 發明（設計）人: 吳文惠;楊勁峰
• 申請（專利權）人: 山東人和集團有限公司
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C08B37/08
• 代理公司: 濟南日新專利代理事務所 37224
• 代理人: 李科偉

1.一種利用魷魚眼制備小分子透明質酸的方法，其特征在于：其經過以下步驟：

（1）原料預處理：將新鮮魷魚眼粉碎，加入其2-5倍重量的丙酮，靜置10-15min，離心除去丙酮，得到魷魚眼原料；

（2）透明質酸提取：稱取步驟（1）中得到的魷魚眼原料，加入其5-10倍重量、質量分數為1-15%的月桂醇聚醚硫酸酯銨水溶液，不斷攪拌，收集產生的氣泡，在收集的氣泡中加入氣泡重量2-5倍的、質量濃度95%的乙醇，同時用酸溶液調節pH值為5-6，充分攪拌，離心收集沉淀，并用丙酮反復沖洗，得粗透明質酸；

（3）除雜：將步驟（2）中得到的粗透明質酸用超臨界二氧化碳處理；選取處理后剩余物料，加入等質量的蒸餾水，同時加入蒸餾水重量2-6%的蛋白酶，酶解并在結束后滅活，離心，取上清液；

（4）透明質酸小分子化：將步驟（3）中得到的上清液中加入質量分數為3-5%的透明質酸酶，攪拌，酶解條件為：pH值6-8，酶解溫度30-40℃，酶解時間30-90min，酶解結束后離心，取上清液；

（5）透析、干燥：將步驟（4）中得到的上清液轉移至透析袋中，經過兩步透析，在室溫下共透析20-24h，取第二步透析的去離子水，加入其1-3倍體積的、質量濃度95%的乙醇，靜置，離心，取沉淀，冷凍干燥，即得透明質酸。

2.根據權利要求1所述的一種利用魷魚眼制備小分子透明質酸的方法，其特征在于：在步驟（2）中，所述的酸溶液為鹽酸溶液、檸檬酸溶液、硫酸溶液、醋酸溶液中的一種或兩種以上。

3.根據權利要求1所述的一種利用魷魚眼制備小分子透明質酸的方法，其特征在于：在步驟（3）中，所述的超臨界二氧化碳處理的條件為：壓力控制為20-25MPa，溫度控制為20-30℃，二氧化碳流速15-20 kg·h-1，處理時間20-25min。

4.根據權利要求1所述的一種利用魷魚眼制備小分子透明質酸的方法，其特征在于：在步驟（3）中，所述的蛋白酶由胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的兩種酶組成，兩種酶添加比例為1:1。

5.根據權利要求1或4所述的一種利用魷魚眼制備小分子透明質酸的方法，其特征在于：在步驟（3）中，所述的酶解的條件為：酶解溫度40-50℃，酶解時間60-180min，pH值6-8。

6.根據權利要求1所述的一種利用魷魚眼制備小分子透明質酸的方法，其特征在于：在步驟（4）中，所述的透明質酸酶的制備方法為：

（s1）選取新鮮魷魚眼，粉碎后放入25-35℃培養箱中，自然發酵10-24h；

（s2）過濾取濾液；

（s3）濾液中加入95%乙醇，離心取沉淀，沉淀用去離子水復溶、離心，并重復3遍，得沉淀；

（s4）取含10-30%透明質酸的液體培養基，按培養基重量接種5-10%的、步驟s3）中得到的沉淀，在溫度25-35℃，培養10-24h，離心，取上清液，即獲得透明質酸酶。

7.根據權利要求1所述的一種利用魷魚眼制備小分子透明質酸的方法，其特征在于：在步驟（5）中，所述的兩步透析，選擇不同截留分子量的透析袋，其第一步用透析袋截留分子量為1000Da的透明質酸，透析時間10-12h；其第二步透析是將透析液轉入截留透明質酸分子量為40000Da的透析袋，放入去離子水中，透析時間10-12h，最后收集去離子水。