[發明專利]一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法

在審

• 申請號: 201911275123.5
• 申請日: 2019-12-12
• 公開（公告）號: CN111286471A
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 熊曉燕;李洋;王冠;張茜茜;周櫻;詹志春
• 申請（專利權）人: 湖北華揚科技發展有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/225
• 代理公司: 湖北天領艾匹律師事務所 42252
• 代理人: 程明

本發明涉及一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法，具體包括以下步驟：S1：將甘油管菌種進行劃線得到單菌落，單菌落在種子培養基上進行種子培養并保藏；S2：將S1中保藏的甘油管接種于活化培養基上，靜置培養形成一級種子液；S3：吸取一定量的一級種子液接到種子擴大培養基上，靜置培養形成二級種子液；S4：將二級種子液接入含有豆粕水解液的發酵培養基中厭氧發酵，得到副干酪乳桿菌發酵液。本發明提出的培養副干酪乳桿菌的方法是采用豆粕水解液作為氮源，替代或減少酵母粉等昂貴氮源的用量，降低副干酪乳桿菌的生產成本；通過優化培養基成分、發酵條件，能從發酵液中獲得高濃度副干酪乳桿菌，同時發酵液中無不溶性物質，便于濃縮。

技術領域

本發明涉及微生物發酵技術領域，特別是涉及一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法。

背景技術

副干酪乳桿菌屬于革蘭氏陽性菌，是一種益生菌，對維持動物腸道菌群生態平衡起到重要作用，特別是在幼齡動物的腸道保健和疾病的防疫和治療上有突出的表現。許多企業將其制成微生態飼料添加劑。研究表明：副干酪乳桿菌不僅對很多細菌有拮抗作用，有的菌株還可抑制酵母及霉菌的生長。Nemcova等報道L.paracasei可顯著降低剛斷奶幼豬體內梭菌屬和腸桿菌的數量。Schwenninger等用副干酪乳桿菌副干酪亞種L.paracaseisubsp.paracasei和詹氏丙酸細菌Propionibacteriumjensenii的混合培養物添加到酸奶中，在6℃下也能夠有效抑制酵母腐敗菌、霉菌等的生長。在副干酪乳桿菌生產過程中，培養基的配方及發酵條件的控制至關重要，直接影響著發酵液中的活菌數量。

傳統副干酪乳桿菌生產方法中，發酵液中的副干酪乳桿菌總菌數不高，用于生產的發酵培養基中常用玉米粉、豆餅粉來當微生物生長所需的碳源和氮源，由于玉米粉、豆餅粉水溶性不好，一方面不利于微生物利用，另一方面發酵液殘留的這些不溶性成分，會引起后處理困難，使得副干酪乳桿菌生產成本較高。又或者采用酵母膏及酵母浸粉這類昂貴氮源，造成資源浪費。

發明內容

為了克服現有技術的上述不足，本發明提出了一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法，解決現有副干酪乳桿菌制備成本高，發酵液殘留不溶性成分造成后期處理困難的技術問題。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法，具體包括以下步驟：

S1：將甘油管菌種進行劃線得到單菌落，再將得到的單菌落在種子培養基上進行種子培養，并保藏；

S2：取S1中保藏的甘油管接種于活化培養基上，靜置培養形成一級種子液；

S3：吸取一定量的一級種子液接到種子擴大培養基上，靜置培養形成二級種子液；

S4：將二級種子液接入含有豆粕水解液的發酵培養基中厭氧發酵，得到副干酪乳桿菌發酵液。

進一步的，S1中在甘油管菌種的斜面培養基上劃線得到單菌落，所述斜面培養基包括如下體積百分比組分：葡萄糖0.5-1％、酵母浸粉0.5-1％、胰蛋白胨0.5-1％、牛肉浸粉0.2-1％，硫酸鎂0.01-0.02％、硫酸錳0.005-0.008％、乙酸鈉0.5-0.1％、檸檬酸銨0.2-0.5％、磷酸氫二鉀0.2-1％、吐溫-80 0.1-0.5％、瓊脂粉1.5％、余量為水。

進一步的，所述斜面培養基的制備過程為：將葡萄糖、酵母浸粉、胰蛋白胨、牛肉浸粉、硫酸鎂、硫酸錳、乙酸鈉、檸檬酸銨、磷酸氫二鉀、吐溫-80、瓊脂粉及水按配方稱取混合溶解，制成培養液，加熱升溫滅菌一定時間后，分裝至平板中，待冷卻放入37℃培養箱過夜培養，選出無雜菌平板放入4℃冰箱待用。