[發明專利]一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法

在審

• 申請號: 201911275123.5
• 申請日: 2019-12-12
• 公開（公告）號: CN111286471A
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 熊曉燕;李洋;王冠;張茜茜;周櫻;詹志春
• 申請（專利權）人: 湖北華揚科技發展有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/225
• 代理公司: 湖北天領艾匹律師事務所 42252
• 代理人: 程明

1.一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1：將甘油管菌種進行劃線得到單菌落，再將得到的單菌落在種子培養基上進行種子培養，并保藏；

S2：取S1中保藏的甘油管接種于活化培養基上，靜置培養形成一級種子液；

S3：吸取一定量的一級種子液接到種子擴大培養基上，靜置培養形成二級種子液；

S4：將二級種子液接入含有豆粕水解液的發酵培養基中厭氧發酵，得到副干酪乳桿菌發酵液。

2.根據權利要求1所述的一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法，其特征在于，S1中在甘油管菌種的斜面培養基上劃線得到單菌落，所述斜面培養基包括如下體積百分比組分：葡萄糖0.5-1％、酵母浸粉0.5-1％、胰蛋白胨0.5-1％、牛肉浸粉0.2-1％，硫酸鎂0.01-0.02％、硫酸錳0.005-0.008％、乙酸鈉0.5-0.1％、檸檬酸銨0.2-0.5％、磷酸氫二鉀0.2-1％、吐溫-80 0.1-0.5％、瓊脂粉1.5％、余量為水。

3.根據權利要求2所述的一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法，其特征在于，所述斜面培養基的制備過程為：將葡萄糖、酵母浸粉、胰蛋白胨、牛肉浸粉、硫酸鎂、硫酸錳、乙酸鈉、檸檬酸銨、磷酸氫二鉀、吐溫-80、瓊脂粉及水按配方稱取混合溶解，制成培養液，加熱升溫滅菌一定時間后，分裝至平板中，待冷卻放入37℃培養箱過夜培養，選出無雜菌平板放入冰箱待用。

4.根據權利要求1所述的一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法，其特征在于，S1中的種子培養基、S2中的活化培養基及S3中的種子擴大培養基均包括如下體積百分比組分：葡萄糖1-2％、酵母浸粉0.5-1％、胰蛋白胨0.5-1％、牛肉浸粉1-2％、硫酸鎂0.01-0.05％、硫酸錳0.005％、乙酸鈉0.5％、檸檬酸銨0.2％、磷酸氫二鉀0.2％、吐溫-800.1％、泡敵1-2滴、余量為水。

5.根據權利要求1所述的一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法，其特征在于，S2中種子的活化及S3中擴大培養均是在30-37℃下靜置培養。

6.根據權利要求1所述的一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法，其特征在于，S4中發酵培養基包括如下體積百分比組分：葡萄糖2-5％、豆粕水解液20-30％、硫酸錳0.1-0.5％、碳酸鈣0.5-1％、無水乙酸鈉0.5-1.0％、硫酸鎂0.1-5％、吐溫-80 0.1-1％、谷氨酸鈉0.1-1％、泡敵0.01-0.2％、余量為水。

7.根據權利要求1或6任意一項所述的一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法，其特征在于，S4中，發酵培養基中豆粕水解液的制備步驟，具體包括：

S41：將豆粕粉按固液比1:5～1:10的比例制成豆粕粉水溶液，定容，加氫氧化鈉，混合均勻后預處理；

S42：冷卻到45℃，加入堿性蛋白酶，調節pH至10.5，并于45℃下水解1～1.5h；

S43：降低pH至8.0，升溫至65℃，保溫一段時間后，加水定容、過濾，取上清，加熱升溫滅菌，制得豆粕水解液。

8.根據權利要求1所述的一種利用豆粕水解液高密度培養副干酪乳桿菌的方法，其特征在于，S4中發酵的條件是：30-37℃厭氧發酵，攪拌轉速50-100rpm，用氨水調節pH 6.0-6.5。