[發明專利]多種細胞鑒定試劑盒及操作方法

有效

• 申請號: 201911265615.6
• 申請日: 2019-12-11
• 公開（公告）號: CN110907644B
• 公開（公告）日: 2023-01-06
• 發明（設計）人: 何志昂;姜維;吳慶軍
• 申請（專利權）人: 深圳市達科為生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/574;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種多種細胞鑒定試劑盒及操作方法。該試劑盒包括試驗孔板和分別容納活細胞染色劑和清洗劑的試劑瓶，所述試驗孔板包括孔板架和可拆卸設置在所述孔板架內且帶有多個待測孔的多條包被可拆板條。另外，該試劑盒還包括可拆卸設置在所述孔板架內且帶有多個待測孔的多條未包被可拆板條、位于所述孔板架下方并與可其貼合設置的孔板磁力底座以及容納磁珠偶聯抗體、細胞通透劑、死細胞染色劑的試劑瓶。本發明還涉及多種細胞鑒定試劑盒的操作方法。利用本發明的試劑盒能夠快速、準確地鑒定MSC細胞、NK細胞、CIK細胞、肺癌細胞、前列腺癌細胞等多種細胞，且具有操作步驟簡單、結果易判斷和適用樣本廣等優點。

技術領域

本發明涉及細胞鑒定領域，尤其是涉及一種能夠鑒定多種細胞的試劑盒及操作方法。

背景技術

目前細胞誘導、癌細胞診斷等常用的診斷方法是流式細胞術、酶聯免疫法、免疫組化法。

流式細胞術通過熒光耦合的抗體標記目的細胞檢測熒光信號來進行細胞鑒定，需要使用熒光染料與流式細胞儀配套使用，導致檢測成本增加。另外，熒光抗體需避光保存，熒光易淬滅造成檢測結果不準確，因此，檢測者需要掌握流式細胞儀操作方法與數據處理分析的專業知識。

對于酶聯免疫法，需要同時檢測抗體與包被抗體兩種抗體，從而使得成本增加。另外，檢測物是細胞分泌物或細胞裂解液而非細胞本身，操作步驟較為繁雜。

免疫組化法需要對細胞組織進行包埋切片，染色步驟雖然可以手動操作，但仍需要使用切片機、攤片機、包埋機、顯微鏡等，導致檢測成本增加。同時，免疫組化需要使用一抗二抗兩種抗體以及配套染色液、抗原封閉液、抗原修復液等，檢測成本增加。另外，免疫組化步驟包括包埋、切片、烤片、脫蠟、修復、阻斷、封閉、加一抗、加二抗、顯色、復染、脫水透明、封片等操作極為繁雜，并且顯微鏡結果的判斷需要專業知識人員判斷。

因此，在本領域中仍然需要一種能夠以簡單有效的方式及時、快速且準確鑒定多種細胞的技術手段。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明的一個目的在于提供一種能夠以簡單有效的方式及時、快速且準確地鑒定多種細胞的細胞鑒定試劑盒。所述多種細胞包括但不限于間充質干細胞(MSC)、自然殺傷(NK)細胞、細胞因子誘導殺傷(CIK)細胞、肺癌細胞和前列腺癌細胞。

上述目的通過以下方案來實現：

在第一方面，一種多種細胞鑒定試劑盒，其包括試驗孔板和分別容納活細胞染色劑和清洗劑的試劑瓶，所述試驗孔板包括孔板架和可拆卸設置在所述孔板架內且帶有多個待測孔的多條包被可拆板條。在一個優選方案中，所述試驗孔板還包括與所述孔板架蓋合的孔板蓋。在一個優選方案中，所述包被可拆板條上可包被有抗體CD45、CD105、CD34、CD90、CD73、CD3、CD56、CEA、CA125等中的一種或多種。

在該技術方案中，利用所提供的多種細胞鑒定試劑盒，能夠利用細胞膜標志物來鑒定多種細胞，例如MSC細胞、NK細胞、CIK細胞和肺癌細胞。具體而言，通過不同的包被可拆板條包被不同的捕獲抗體，能夠捕獲懸浮細胞中的目標細胞，然后用洗滌液去掉雜細胞，利用活細胞染色劑使被捕獲的目標細胞染色，通過顯色與否來判斷標志物的陰陽性，最后通過酶標儀測對照組與檢測組的吸光值可分析判斷細胞的陽性率。

進一步地，根據前述第一方面所述的多種細胞鑒定試劑盒，所述活細胞染色劑可以為3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(噻唑藍，簡稱MTT)，所述清洗劑可以為磷酸鹽緩沖溶液(PBS)。在一個優選方案中，所述活細胞染色劑還包含0.5-5重量％蘇木素，優選1重量％、1.5重量％、2重量％、2.5重量％、3重量％、3.5重量％、4重量％、4.5重量％蘇木素。