[發明專利]多種細胞鑒定試劑盒及操作方法

有效

• 申請號: 201911265615.6
• 申請日: 2019-12-11
• 公開（公告）號: CN110907644B
• 公開（公告）日: 2023-01-06
• 發明（設計）人: 何志昂;姜維;吳慶軍
• 申請（專利權）人: 深圳市達科為生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/574;G01N33/543
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• 代理人: 暫無信息

1.一種用于操作多種細胞鑒定試劑盒的方法，其特征在于所述試劑盒包括試驗孔板和分別容納活細胞染色劑和清洗劑的試劑瓶，所述試驗孔板包括孔板架和可拆卸設置在所述孔板架內且帶有多個待測孔的多條包被可拆板條，其中所述包被可拆板條上包被有抗CD45、CD105、CD34、CD90、CD73、CD3、CD56、CEA和CA125的抗體，所述活細胞染色劑為MTT，所述清洗劑為PBS；其中所活細胞染色劑染色劑還含有1-5重量%蘇木素,還包括可拆卸設置在所述孔板架內且帶有多個待測孔的多條未包被可拆板條、位于所述孔板架下方并與其貼合設置的孔板磁力底座以及分別容納磁珠偶聯抗體、細胞通透劑和死細胞染色劑的試劑瓶;所述孔板底座有多個磁力條，所述磁珠偶聯的抗體為抗PSA、p63和p40抗體，所述細胞通透劑為Triton-X或二甲苯，所述死細胞染色劑為臺盼藍；所述操作辦法包括以下步驟： 1）向包被可拆板條加入待檢測細胞和對照細胞的培養懸液，向包被可拆板條中的1個待測孔加入PBS作為空白對照孔，在30-45℃孵育10-30min； 2）用清洗劑清洗，加入活細胞染色劑在30-45℃孵育5-15min，再次用清洗劑清洗，加入50-150 μl DMSO并觀察所產生的顏色； 3）將所述細胞鑒定試劑盒置于酶標儀上，讀取波長490nm下的吸光值，并根據下式計算待測孔的細胞陽性率： 待測孔的細胞陽性率=（待測孔的平均吸光值-空白對照的平均吸光值）/（陽性對照的平均吸光值-空白對照的平均吸光值）； 4）根據步驟2）和步驟3）的結果鑒定待檢測細胞的類型； 如果含有抗CD3抗體的包被可拆板條為無色，含有抗CD56抗體的包被可拆板條為紫色，且CD3表達陽性率≤10%，CD56表達陽性率≥40%，則確定待測細胞為NK細胞；如果含有抗CD3、CD56抗體的包被可拆板條為紫色，且CD3、CD56表達陽性率≥40%，則可確定待測細胞為CIK細胞；如果含有抗CEA、CA125抗體的包被可拆板條為紫色，且CEA、CA125表達陽性率≥20%，則確定待測細胞為肺癌細胞；所述操作方法還包括以下步驟： 1）向未包被可拆板條加入檢測細胞與對照細胞培養懸液，加入等體積細胞通透劑，然后加入磁珠偶聯抗PSA、p63和p40抗體混勻，在30-45℃孵育10-30min； 2）將試驗孔板放入孔板磁力底座，靜置2-10min，倒掉懸液并用清洗劑清洗待測孔； 3）向待測孔中加入5-20μl死細胞染色劑，觀察所產生的顏色； 如果觀察到含有抗PSA、p63和p40抗體的包被可拆板條均顯示為藍色，則確定待測試細胞為前列腺癌細胞；所述操作方法不用于疾病的診斷和/或治療。