[發明專利]一種高穩定性、高亮度的Halo-tag探針及其合成方法與應用

有效

• 申請號: 201911257897.5
• 申請日: 2019-12-10
• 公開（公告）號: CN112939934B
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發明（設計）人: 徐兆超;王光英;喬慶龍
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C07D401/04
• 分類號: C07D401/04;C09K11/06;G01N21/64;A61K49/00
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 張晨

1.一種高穩定性、高亮度的Halo-tag探針，其特征在于：該探針以萘酰亞胺為熒光基團，氯己烷為結合位點，該類探針的結構如下：

2.一種如權利要求1所述Halo-tag探針的制備方法，其特征在于，該方法包含以下合成步驟：

(1)中間體Halo-Br的合成

將4-溴-1,8-萘酐溶于乙醇中，而后向該反應液中加O-(6-氯己基)二甘醇胺；將反應液加熱至50-100℃，攪拌2-7h；冷卻降溫后，減壓除去溶劑，殘余物經硅膠柱分離得無色油狀產物Halo-Br，其中柱層析的洗脫劑為石油醚：二氯甲烷＝10:1-2:1；

(2)Halo-tag探針的合成

Halo-Br、氮雜環酮、Cs₂CO₃、G3-Xantphos為XantPhos Pd G395％置于雙口瓶中并用氮氣置換3-4次；向反應體系中加入干燥的二氧六環，并加熱至70-140℃；2-7h后減壓除去溶劑，殘余物經硅膠柱分離得固體為熒光探針。

3.根據權利要求2所述的Halo-tag探針的制備方法，其特征在于：氮雜環酮為

4.如權利要求2所述的Halo-tag探針的制備方法，其特征在于：步驟(1)中：4-溴-1,8-萘酐與O-(6-氯己基)二甘醇胺的質量比為1:0.7-1.5；4-溴-1,8-萘酐與無水乙醇的質量與體積比為1:20-60g/mL。

5.如權利要求2所述的Halo-tag探針的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，Halo-Br與氮雜環酮的質量比為1:0.25-0.75；Cs₂CO₃與氮雜環酮的摩爾比為1:1；G3-Xantphos為XantPhos Pd G3 95％為Halo-Br的1mol％；Halo-Br與二氧六環質量與體積比為1:80-240g/mL。

6.一種以非疾病的診斷與治療為目的的如權利要求1所述的Halo-tag探針在細胞、組織及活體內的熒光成像的應用。

7.一種以非疾病的診斷與治療為目的的如權利要求1所述的Halo-tag探針在Halo-tag蛋白的識別與檢測中的應用。

8.一種以非疾病的診斷與治療為目的的如權利要求1所述的Halo-tag探針在雙光子熒光成像中的應用。