[發明專利]一種副豬嗜血桿菌病、豬鏈球菌病和豬多殺性巴氏桿菌病三聯滅活疫苗及其制備方法

在審

• 申請號: 201911256989.1
• 申請日: 2019-12-10
• 公開（公告）號: CN110812473A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 郭鑫;黃劍華;陳奕;梅敏敏
• 申請（專利權）人: 廣東君睿生物技術研究有限公司
• 主分類號: A61K39/09
• 分類號: A61K39/09;A61K39/102;A61K39/39;A61P31/04
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

1.一種副豬嗜血桿菌病、豬鏈球菌病和豬多殺性巴氏桿菌病三聯滅活疫苗，其特征在于，所述三聯滅活疫苗包括抗原濃縮液和納米鋁佐劑；

所述抗原濃縮液包括滅活的副豬嗜血桿菌血清4型H23株、副豬嗜血桿菌血清5型H24株、豬鏈球菌血清2型S23株、豬多殺性巴氏桿菌莢膜A型P13株以及豬多殺性巴氏桿菌莢膜B型P11株的抗原濃縮液。

2.根據權利要求1所述三聯滅活疫苗，其特征在于，所述副豬嗜血桿菌血清4型H23株、副豬嗜血桿菌血清5型H24株、豬鏈球菌血清2型S23株、豬多殺性巴氏桿菌莢膜A型P13株以及豬多殺性巴氏桿菌莢膜B型P11株的抗原濃縮液體積比為1:1:1:1:1。

3.根據權利要求1所述三聯滅活疫苗，其特征在于，所述副豬嗜血桿菌血清4型H23株、副豬嗜血桿菌血清5型H24株、豬鏈球菌血清2型S23株、豬多殺性巴氏桿菌莢膜A型P13株以及豬多殺性巴氏桿菌莢膜B型P11株的抗原濃縮液含量均為5×10⁷CFU/mL。

4.根據權利要求1所述三聯滅活疫苗，其特征在于，所述納米鋁佐劑體積比為10％。

5.根據權利要求1所述三聯滅活疫苗，其特征在于，所述三聯滅活疫苗還包括1％(w/v)的硫柳汞和獸醫學可接受的疫苗稀釋劑。

6.根據權利要求5，其特征在于所述疫苗稀釋劑為0.9％NaCl溶液或PBS溶液。

7.應用權利要求1所述三聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，所述三聯滅活疫苗制備方法包括以下步驟：

S1、分別將副豬嗜血桿菌血清4型H23株、血清5型H24株，豬鏈球菌血清2型S23株，豬多殺性巴氏桿菌莢膜A型P13株、豬多殺性巴氏桿菌莢膜B型P11株的菌株增殖得分別得到培養液；

S2、分別取步驟S1中的培養液，加入培養液總體積0.1％-0.15％的滅活劑，經4℃滅活72小時，期間攪拌數次，再在37℃水浴2小時，得到滅活的副豬嗜血桿菌血清4型H23株、血清5型H24株，豬鏈球菌血清2型S23株，豬多殺性巴氏桿菌莢膜A型P13株、豬多殺性巴氏桿菌莢膜B型P11株菌的培養液；

S3、將步驟S2中滅活的副豬嗜血桿菌血清4型H23株、血清5型H24株，豬鏈球菌血清2型S23株，豬多殺性巴氏桿菌莢膜A型P13株、豬多殺性巴氏桿菌莢膜B型P11株菌的培養液進行濃縮，再分別加入0.9％NaCl溶液或PBS溶液重懸菌體，得到副豬嗜血桿菌血清4型H23株、副豬嗜血桿菌血清5型H24株、豬鏈球菌血清2型S23株、豬多殺性巴氏桿菌莢膜A型P13株以及豬多殺性巴氏桿菌莢膜B型P11株的抗原濃縮液；

S4、取步驟S3中副豬嗜血桿菌血清4型H23株、副豬嗜血桿菌血清5型H24株、豬鏈球菌血清2型S23株、豬多殺性巴氏桿菌莢膜A型P13株以及豬多殺性巴氏桿菌莢膜B型P11株菌的抗原濃縮液加入乳化機，同時按配方比例加入納米鋁佐劑、稀釋劑、硫柳汞進行低速攪拌，混合得到副豬嗜血桿菌、豬鏈球菌和豬多殺性巴氏桿菌滅活疫苗。

8.根據權利要求7所述三聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中滅活劑為β-丙內酯。

9.根據權利要求7所述三聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟S3中副豬嗜血桿菌血清4型H23株、副豬嗜血桿菌血清5型H24株、豬鏈球菌血清2型S23株、豬多殺性巴氏桿菌莢膜A型P13株以及豬多殺性巴氏桿菌莢膜B型P11株的細菌經濃縮后細菌含量為相當于滅活前活菌數為5×10⁹FU/mL。

10.根據權利要求7所述三聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，在步驟S4后分別對副豬嗜血桿菌、豬鏈球菌和豬多殺性巴氏桿菌培養進行無菌檢驗、安全檢驗和效力檢驗。