[發明專利]一種WRI3/4基因、克隆方法及其應用

有效

• 申請號: 201911240799.0
• 申請日: 2019-12-06
• 公開（公告）號: CN111118020B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 黃邦全;程超;韓昀;夏迪;胡書同;黃邦連
• 申請（專利權）人: 湖北大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/20
• 代理公司: 武漢知產時代知識產權代理有限公司 42238
• 代理人: 龔春來

本發明屬于基因工程技術領域，尤其涉及一種油莎豆WRI3/4基因、克隆方法及其應用。所述油莎豆WRI3/4基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；其編碼氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，或其編碼氨基酸序列為與SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具有90％以上同源性且表達同等功能的氨基酸序列。所述油莎豆WRI3/4基因的克隆方法為：以油莎豆為材料，根據高等植物WRI基因保守區段序列設計簡并引物，擴增油莎豆WRI基因保守區段，然后進行5’?RACE和3’?RACE，得到油莎豆5’端和3’端序列；根據油莎豆5’端和3’端序列設計全長序列引物，擴增，即得到油莎豆WRI3/4基因。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，尤其涉及一種油莎豆WRI3/4基因、克隆方法及其應用。

背景技術

油莎豆，又名虎堅果、鐵荸薺、地下核桃，是適合生長在沙地的莎草科一年生塊莖類植物。油莎豆耐旱、耐澇、耐貧瘠、耐鹽堿，在沙質土、白漿土、鹽堿地、黑土及荒地山坡等各種土質的地方均能生長，無論土地肥力高低，均可種植，最適合沙壤土、喜鉀肥。因此，開發利用油莎豆的抗旱基因在抗旱植物培育的實際應用中具有很高的研究價值。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種油莎豆WRI3/4基因、克隆方法及其在培育植物抗旱種質上的應用方法。

本發明提供一種油莎豆WRI3/4基因，所述油莎豆WRI3/4基因的核苷酸序列如SEQID No.1所示，其編碼氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，或其編碼氨基酸序列為與SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列具有90％以上同源性且表達同等功能的氨基酸序列。

本發明還提供了包含上述油莎豆WRI3/4基因的重組載體。

本發明還提供了包含上述重組載體的轉化體。

本發明還提供了上述油莎豆WRI3/4基因的克隆方法，包括以下步驟：

以油莎豆為材料，根據高等植物WRI基因保守區段序列設計簡并引物，擴增油莎豆WRI基因保守區段，然后進行5’-RACE和3’-RACE，得到油莎豆5’端和3’端序列；根據油莎豆5’端和3’端序列設計全長序列引物，擴增，即得到油莎豆WRI3/4基因。

進一步地，根據高等植物WRI基因保守區段序列設計的簡并引物序列為：

degenerate FP：5‘-GGTTCGAGGCCCACYTNTGGGAYAA；

degenerate RP：5‘-TCGATGGCGGCCADRTCRTANGC；

根據油莎豆5’端和3’端序列設計的全長序列引物為：

WRI3/4full length FP：5‘-TCCCCTCTCGTTTTAGCTCTCCTTCATTTC；

WRI3/4full length RP：5‘-GGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTAC。

本發明提供的油莎豆WRI3/4基因能夠應用于培育植物抗旱種質。

進一步地，利用油莎豆WRI3/4基因培育植物抗旱種質的方法為：

S1，載體構建：將油莎豆WRI3/4基因和植物表達載體質粒進行酶切、連接，轉化大腸桿菌，篩選鑒定重組子，獲得超量表達載體；

S2，植物轉基因：利用帶有超量表達載體質粒的農桿菌轉化待培育植物，收獲T1代種子，T1代種子萌發后進行PCR鑒定，陽性植株自交獲得T2代種子，T2代種子萌發后進行PCR鑒定，陽性植株自交獲得純合T3代轉基因種子。