[發明專利]一種WRI3/4基因、克隆方法及其應用

有效

• 申請號: 201911240799.0
• 申請日: 2019-12-06
• 公開（公告）號: CN111118020B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 黃邦全;程超;韓昀;夏迪;胡書同;黃邦連
• 申請（專利權）人: 湖北大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/20
• 代理公司: 武漢知產時代知識產權代理有限公司 42238
• 代理人: 龔春來

1.一種油莎豆WRI3/4基因在培育植物抗旱種子的應用，其特征在于，所述油莎豆WRI3/4基因的核苷酸序列如SEQ ID No .1所示；其編碼氨基酸序列如SEQ ID No .2所示，利用所述油莎豆WRI3/4基因培育植物抗旱種子的方法為：

S1，載體構建：將油莎豆WRI3/4基因和植物表達載體質粒進行酶切、連接，轉化大腸桿菌，篩選鑒定重組子，獲得超量表達載體；

S2，植物轉基因：利用帶有超量表達載體質粒的農桿菌轉化待培育植物，所述待培育植物為擬南芥，收獲T1代種子，T1代種子萌發后進行PCR鑒定，陽性植株自交獲得T2代種子，T2代種子萌發后進行PCR鑒定，陽性植株自交獲得純合T3代轉基因種子。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述農桿菌為農桿菌EHA105。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，步驟S2中，進行PCR鑒定的引物序列為：

NPTII FP：5‘-CCGGCCGCTTGGGTGGAGAGG；

NPTII RP：5‘-CGCCCAATAGCAGCCAGTCCCTTC。

4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述油莎豆WRI3/4基因的克隆方法，包括以下步驟：以油莎豆HUBU-1為材料，根據高等植物WRI基因保守區段序列設計簡并引物，擴增油莎豆WRI基因保守區段，然后進行5’- RACE和3’-RACE，得到油莎豆5’端和3’端序列；根據油莎豆5’端和3’端序列設計全長序列引物，擴增，即得到油莎豆WRI3/4基因。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，根據高等植物WRI基因保守區段序列設計的簡并引物序列為：

degenerate FP：5‘-GGTTCGAGGCCCACYTNTGGGAYAA；

degenerate RP：5‘-TCGATGGCGGCCADRTCRTANGC；

根據油莎豆5’端和3’端序列設計的全長序列引物為：

WRI3/4 full length FP：5‘-TCCCCTCTCGTTTTAGCTCTCCTTCATTTC；

WRI3/4 full length RP：5‘-GGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTAC。