[發明專利]用于檢測血清淀粉樣蛋白A的免疫層析試紙條及其制備與檢測方法

在審

• 申請號: 201911236705.2
• 申請日: 2019-12-05
• 公開（公告）號: CN112924686A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 李富友;徐明;陳銳
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/558;G01N21/78
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 趙徐平

本發明公開了一種用于檢測血清淀粉樣蛋白A的免疫層析試紙條及其制備與檢測方法，屬于抗原檢測技術領域。試紙條包括底板；底板頂部設有依次相連的樣品區、檢測區與吸附區；檢測區設有測試線與質控線；樣品區設有用于檢測血清淀粉樣蛋白A的探針及樣品上樣位；探針位于更靠近檢測區一側；探針由有機長余輝發光材料與檢測抗體或核酸適配體組成；檢測抗體或核酸適配體能與血清淀粉樣蛋白A特異性結合。本發明中的有機長余輝發光材料可以發出更長時間和更高亮度的余輝，用于免疫層析試紙條對血清淀粉樣蛋白A進行檢測時，能輕松被手機等常見電子設備采集分析，甚至可以肉眼觀察，極大提高了檢測的便利性及拓寬了使用場景，真正做到POCT。

技術領域

本發明涉及抗原檢測技術領域，更具體的說是涉及用于檢測血清淀粉樣蛋白A的免疫層析試紙條及其制備與檢測方法。

背景技術

血清淀粉樣蛋白A(Serum amyloid A，SAA)是由肝臟合成的104個氨基酸構成的蛋白質，是一種急性期蛋白，通常是在高密度脂蛋白顆粒運輸的伴隨作用中產生的作為載脂蛋白的蛋白質。在“急性期反應”期間，如細菌、病毒、真菌等病原體侵入人體所引起的局部組織和全身性炎癥反應期間，為了對抗組織損傷、感染和創傷的挑戰，身體對炎癥刺激產生即時反應，血漿中的SAA水平從正常水平1-5mg/L增加到1000-5000mg/L的水平。此外，SAA與淀粉樣斑塊的形成也有關；淀粉樣斑塊的形成與許多功能障礙有關，包括阿爾茨海默病和多發性硬化等，這些斑塊是截短的不溶性淀粉樣纖維積聚的結果，而淀粉樣纖維被認為是由許多細胞相關蛋白酶和血清蛋白酶自然發生的SAA分解代謝過程引起的。因此，檢測血清中SAA對臨床研究具有重大意義。

目前的血清中SAA的檢測技術主要包括：比色法(如酶聯免疫吸附實驗(ELISA)和膠體金免疫層析試紙條等)、化學發光法(如管式的磁化學發光法和板式的磁化學發光法)、電化學法(循環伏安法和線性掃描伏安法)和熒光法(熒光均相免洗實驗)等。上述四類技術都有各自的優缺點，其中ELISA需要專業的操作人員操作且耗時較長；化學發光和電化學發光靈敏度非常高，在大型醫院已經實現自動化、高通量、高靈敏的定量檢測，但這兩種方法目前大多數由國外診斷公司提供技術服務，試劑和全自動化儀器價格昂貴，不適合單人份或小批量檢測，尤其是在經濟條件落后的基層醫院、社區診所、衛生院等，無法大面積推廣使用。而熒光均相免洗檢測技術所有試劑都需要4℃冷藏保存，運輸成本較高，也限制了其在經濟條件落后的基層醫院、社區診所、衛生院等地的使用。

近年來發展了膠體金免疫層析檢測技術，其主要以膠體金作為輸出信號，由于膠體金探針的光密度不足，導致檢測靈敏度較低，且難以定量，無法滿足臨床檢測的要求。隨后，熒光探針在免疫層析應用上得到發展，其中基于熒光染料的熒光探針應用最為廣泛。熒光染料通常直接標記在抗體或包被抗體的微球上，或包埋于納米顆粒內再修飾抗體。但是傳統熒光染料存在激發光源主要是紫外光且斯托克斯位移較小等缺點，在檢測過程中會導致自發的熒光信號干擾(血液或血清樣本在紫外光激發下會產生熒光信號)和激發光源光信號的干擾等問題，這些不利因素將嚴重影響到檢測信號的準確性和穩定性。

長余輝發光材料是一類特殊的發光材料，其在去除激發光源后還可以持續長時間的發光。現有技術中，長余輝發光材料的發光壽命通常要大于一百毫秒，其在許多重要領域內均具有重要的應用價值。目前商品化的長余輝發光材料多為稀土或過渡金屬摻雜的鋁酸鹽、硅酸鹽、鈦酸鹽或硫化物等無機長余輝材料。

高溫固相合成是制備無機長余輝發光材料最普遍、有效的生產方法。高溫有利于獲得較好的長余輝發光性能，但高溫固相反應條件苛刻、能耗高，材料形貌均勻度也難以控制，且材料的粒徑普遍較大。經研磨后篩選可以縮小高溫固相法合成材料的粒徑，但粒徑變小至納米量級后，材料的發光亮度也會急劇下降；例如，將商業化的微米級無機長余輝發光粉體研磨到100nm量級時，發光亮度會降低兩個數量級。此外，無機長余輝發光納米材料發光性能較弱，需要借助專業設備進行檢測，因而限制了其進一步推廣和臨床輔助應用。